熒光顯微鏡是一種對(duì)能發(fā)熒光的物質(zhì),或經(jīng)熒光色素染色后能發(fā)熒光的物質(zhì)進(jìn)行觀察的顯微鏡。它有如下特點(diǎn):
⒈ 它以紫外光或蘭紫單色光激發(fā)標(biāo)本的熒光。因紫外光是不可見光,故由標(biāo)本發(fā)出的熒光與背景反差很大。熒光顯微鏡通常是在黑暗的背景下觀察彩色圖象的,而普通顯微鏡是在亮的背景下觀察較暗的樣品的。熒光顯微鏡的對(duì)比度約為普通顯微鏡的一百倍,因此可觀察到用普通顯微鏡看不到的結(jié)構(gòu)和細(xì)節(jié)。
⒉ 用肉眼或普通顯微鏡觀察經(jīng)熒光色素染色的樣品時(shí),只可看到整個(gè)標(biāo)本僅以同一顏色著色。而用熒光顯微鏡觀察時(shí),標(biāo)本會(huì)發(fā)出染色色素的熒光,呈現(xiàn)出標(biāo)本的彩色圖案,易于鑒別,可減輕眼睛的疲勞。
⒊ 用熒光色素染色,方法簡單,制作標(biāo)本容易,有利于快速工作。
⒋ 用于染色的熒光色素只要很低的濃度就能發(fā)出明亮的熒光,一般對(duì)機(jī)體無毒,故有利于活體觀察,如研究功能器官的變化過程和細(xì)微結(jié)構(gòu),某些代謝過程的變化等。
⒌ 利用熒光還有助于分析物質(zhì)的化學(xué)成分。例如,組織中有些重要成分能與藥物起作用而發(fā)熒光,拒此可鑒定它們的存在或定位。
熒光顯微鏡是生物醫(yī)學(xué)研究的重要工具。幾乎所有的有機(jī)分子都能夠直接或經(jīng)適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)處理后發(fā)出熒光而被觀察分析。在有機(jī)化學(xué)和醫(yī)藥方面主要使用橙色和黃綠色兩種熒光,而在無機(jī)化學(xué)方面,熒光的顏色很多。此外,還有一些物質(zhì),即使在紫外線照射停止之后,還可繼續(xù)發(fā)光,呈磷光現(xiàn)象,也可利用這一特性進(jìn)行觀察。
熒光色素染色法不僅可用于精細(xì)觀察一般的細(xì)胞組織,也可用于微生物診斷,根據(jù)免疫反應(yīng)作抗原的組織化學(xué)檢驗(yàn),以至活體觀察、細(xì)胞的生死鑒別等。近年來,熒光抗體法不僅已廣泛地用于組織化學(xué)、微生物學(xué)、病理學(xué)等基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,在抗體的合成、濾過性病毒的增殖和有關(guān)荷爾蒙激素及癌等的組織抗原的研究方面取得不少成果,并已作為臨床診斷手段被推廣,因此要求熒光顯微鏡的操作要更加方便而準(zhǔn)確。
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