實驗十八 微生物大小的測定

一、基本原理
　　微生物細(xì)胞大小，是微生物的形態(tài)特征之一，也是分類鑒定的依據(jù)之一。由于菌體很小，只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細(xì)胞大小的工具有目鏡測微尺（圖Ⅳ-4）和鏡臺測微尺（圖Ⅳ-5）。
　　鏡臺測微尺（圖Ⅳ-5）是*部分刻有等分線的載玻片。一般將1mm等分為100格（或2mm等分為200格），每格長度等于0．01mm（即106μm）。是于校正目鏡測微尺每格長度的。
　　目鏡測微尺（圖Ⅳ-4，A）是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片，其*刻有的刻度，有等分50小格或100小格兩種，每5小格間有一長線相隔。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同，目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同，因此，目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小，在使用前必須用鏡臺測微尺進(jìn)行校正，以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值，然后才可用來測量微生物的大小。
二、器材
　　枯草芽孢桿菌染色玻片標(biāo)本，目鏡測微尺，鏡臺測微尺，顯微鏡，擦鏡紙，香柏油等。
三、操作步驟
　　1．目鏡測微尺的標(biāo)定
　　（1）放置目鏡測微尺取出接目鏡，旋開接目鏡透鏡，將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內(nèi)的隔板上（圖Ⅳ-4，B），然后旋上接目透鏡，zui后將此接目鏡插入鏡筒內(nèi)（圖Ⅳ-4，C）。
　　（2）放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上，使刻度面朝上。
　　（3）校正目鏡測微尺先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，當(dāng)看清鏡臺測微尺后，轉(zhuǎn)動接目鏡，使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行，移動推動器，使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區(qū)間的兩對刻度線*重合，然后計數(shù)出兩對重合線之間各自所占的格數(shù)（圖Ⅳ-6）。
　　根據(jù)計數(shù)得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線之間各自所占的格數(shù)，通過如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實際長度。
　　目鏡測微尺每小格長度（μm）=
　　同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。
　　2．菌體大小的測定
　　目鏡測微尺校正后，移去鏡臺測微尺，換上枯草芽孢桿菌染色玻片標(biāo)本，校正焦距使菌體清晰，轉(zhuǎn)動目鏡測微尺（或轉(zhuǎn)動染色標(biāo)本），測出枯草芽孢桿菌的長和寬各占幾小格，將測得的格數(shù)乘以目鏡測微尺每小格所代表的長度，即可換算出此單個菌體的大小值，在同一涂片上需測定10至20個菌體，求出其平均值，才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體來進(jìn)行測定。
　　3．取出目鏡測微尺，將接目鏡放回鏡筒，再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭后，放回盒內(nèi)保存。
四、實驗報告
（1）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表。
（2）在高倍鏡下測量枯草芽孢桿菌大小結(jié)果填入下表。