iTRAQ定量蛋白組學技術

iTRAQ定量蛋白組學技術檢測技術服務詳情介紹

同位素標記相對和juéduì定量（Isobaric Tag for Relative and Absolute Quantitation，iTRAQ）技術是由美國AB Sciex公司研發的一種多肽體外標記技術。該技術采用4種或8種同位素的標簽，通過特異性標記多肽的氨基基團，而后進行串聯質譜分析，可同時比較4種或8種不同樣品中蛋白質的相對含量或juéduì含量。

iTRAQ試劑由報告基團、平衡基團和肽反應基團三部分組成，形成4種或8種相對分子質量均等量（145或305）的異位標簽。

• 報告基團：指示蛋白樣品豐度水平。4-plex標簽的報告基團質量分別為114 Da、115 Da、116 Da和117 Da。

• 平衡基團：平衡報告基團的質量差，使等重標簽重量一致，保證標記的同一肽段m/z相同。4-plex標簽的平衡基團質量分別為31 Da、30 Da、29 Da和28 Da，這使4個iTRAQ標簽的等重標簽的總質量均等于145 Da。

• 肽反應基團：能與賴氨酸側鏈或肽段的N端發生置換反應，完成對肽段的標記。

圖1 iTRAQ標簽結構（4標）

iTRAQ技術定量分析蛋白質組學的一般流程：

1、蛋白質酶解：將蛋白樣品酶解消化成多肽片段。

2、iTRAQ標記：使用等量不同的iTRAQ標簽標記不同多肽樣品。

3、樣品混合：將不同組的標記肽段等量混合在一起，然后進行真空冷凍干燥，以去除多余的溶劑和試劑。

4、LC-MS/MS質譜檢測及分析：使用質譜儀對混合后的標記肽段進行串聯質譜分析。在質譜儀中，肽段會被碎裂成更小的片段，并產生不同質量的離子。這些離子的強度差異代表了不同肽段的相對豐度。

5、數據分析：通過軟件對質譜原始數據進行處理和分析。不同樣品來源的同一肽段在iTRAQ標記后，分子量wánquán相同，因此在一級質譜圖中呈現為一個峰。在二級碎裂后，報告基團、平衡基團和多肽反應基團之間的鍵斷裂，產生具有特定質量的報告離子。通過比較這些報告離子的峰高和面積，可以定量分析不同樣品間相同肽段的表達量。

圖2 iTRAQ定量蛋白質組學技術流程

iTRAQ除標記樣本數量與TMT有差別外，其他方面（原理和應用）都大致相同。兩者均具備高通量和高準確性的特點，被廣泛應用于定量分析和大規模的蛋白質組比較研究。百泰派克生物科技BTP采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質譜平臺，Orbitrap Fusion質譜平臺，Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供基于體外的iTRAQ/TMT定量蛋白質組學分析服務，此外還有體內標記的SILAC技術，適用于不同的樣本和場景，可滿足您不同的需求，歡迎咨詢。

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