教您如何保養(yǎng)液相色譜儀

一、流動(dòng)相管理：避免污染與沉淀

1. 流動(dòng)相配制要求

• 溶劑純度：使用 HPLC 級(jí)試劑（如甲醇、乙腈、水相緩沖液），避免雜質(zhì)堵塞管路或污染色譜柱。

• 水相處理：緩沖鹽溶液（如磷酸鹽、醋酸鹽）需用超純水配制，過(guò)濾（0.45 μm 濾膜）并超聲脫氣 10–20 分鐘，防止氣泡進(jìn)入泵體或鹽結(jié)晶析出。

• 混合流動(dòng)相注意事項(xiàng)：

• 含緩沖鹽的流動(dòng)相避免與純有機(jī)溶劑（如乙腈）直接混合，易產(chǎn)生鹽沉淀（可先用低比例有機(jī)相過(guò)渡，如 10% 乙腈水相）。

• 長(zhǎng)期存放的流動(dòng)相應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，酸性 / 堿性溶液（pH<2 或> 8）不宜超過(guò) 24 小時(shí)，防止微生物滋生或色譜柱損傷。

2. 流動(dòng)相過(guò)濾與脫氣

• 溶劑瓶過(guò)濾頭：定期檢查溶劑瓶底部的不銹鋼 / 鈦合金過(guò)濾頭，若吸附雜質(zhì)或長(zhǎng)菌，需用稀硝酸浸泡后超聲清洗（每周至少 1 次）。

• 在線脫氣機(jī)維護(hù)：脫氣機(jī)膜長(zhǎng)期使用后可能吸附氣泡，可定期執(zhí)行 “反吹” 操作（按儀器說(shuō)明書(shū)），或用異丙醇沖洗脫氣機(jī)管路（每月 1 次）。

二、關(guān)鍵部件保養(yǎng)：泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器

1. 輸液泵系統(tǒng)

• 泵頭與密封圈維護(hù)：

• 避免空泵運(yùn)行（易磨損密封圈），更換流動(dòng)相時(shí)先排空管路氣泡。

• 每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用 10% 甲醇水沖洗泵頭及管路 30 分鐘（若使用緩沖鹽，需先用純水沖洗 30 分鐘去除殘留鹽），防止鹽結(jié)晶磨損柱塞桿。

• 密封圈壽命約 3–6 個(gè)月（視使用頻率），若出現(xiàn)壓力波動(dòng)或漏液，需及時(shí)更換（更換后用異丙醇低速?zèng)_洗泵頭 2 小時(shí)）。

• 壓力異常處理：

• 壓力突然升高：可能是管路堵塞（如保護(hù)柱、色譜柱入口篩板），逐段排查并沖洗（用 50% 甲醇水低流速反沖，避免反沖色譜柱）。

2. 自動(dòng)進(jìn)樣器

• 進(jìn)樣針與定量環(huán)維護(hù)：

• 避免進(jìn)樣針碰撞樣品瓶或進(jìn)樣口，定期檢查針尖是否彎曲或堵塞（可用放大鏡觀察）。

• 每天實(shí)驗(yàn)后用純甲醇清洗進(jìn)樣針內(nèi)外壁（自動(dòng)進(jìn)樣器可設(shè)置洗針程序，如進(jìn)樣前后用甲醇洗針 3 次）。

• 定量環(huán)（如 10 μL、20 μL）若污染，可注入 10% 稀硝酸浸泡 30 分鐘，再用超純水沖洗至中性，最后用甲醇沖洗保存。

• 樣品盤(pán)與管路清洗：

• 每周用 75% 乙醇擦拭樣品盤(pán)，防止殘留樣品腐蝕金屬部件。

• 長(zhǎng)期不用時(shí)，將進(jìn)樣閥切換至 “l(fā)oad” 位，防止密封圈長(zhǎng)時(shí)間受壓變形。

3. 色譜柱

• 使用前預(yù)處理：

• 新柱拆封后，先確認(rèn)柱效（按說(shuō)明書(shū)測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品，如甲苯、萘的理論塔板數(shù)），再用初始流動(dòng)相低流速（0.2–0.5 mL/min）平衡 30 分鐘，逐步升至正常流速。

• 避免色譜柱反沖（除非說(shuō)明書(shū)允許），建議安裝保護(hù)柱（與分析柱同填料，壽命約為分析柱的 1/5），每分析 10–20 針樣品更換保護(hù)柱芯。

• 日常維護(hù)與保存：

• 分析完畢后，先用高比例水相（如 90% 水 + 10% 甲醇）沖洗 30 分鐘去除緩沖鹽，再用純甲醇 / 乙腈沖洗 60 分鐘置換水相（流速 0.8–1.0 mL/min），防止微生物生長(zhǎng)或疏水坍塌。

• 長(zhǎng)期保存：反相柱用純甲醇 / 乙腈封存，正相柱用正己烷封存，兩端密封后垂直存放于陰涼處（避免陽(yáng)光直射）。

• 柱效恢復(fù)技巧：

• 若峰展寬或拖尾，可嘗試用梯度洗脫沖洗（如 10%→100% 乙腈，30 分鐘），或用專(zhuān)用清洗劑（如 Agilent 柱再生試劑盒）按步驟處理。

• 蛋白污染可用 0.1 mol/L NaOH+30% 乙腈沖洗（注意 pH 范圍，C18 柱通常耐受 pH 2–8）。

4. 檢測(cè)器（以 UV 檢測(cè)器為例）

• 流通池清洗：

• 每天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用純甲醇沖洗流通池 30 分鐘（流速 0.5 mL/min），防止樣品殘留吸附在池壁。

• 若基線噪聲大或出現(xiàn)鬼峰，可能是流通池污染，可注入 30% 硝酸溶液浸泡 1 小時(shí)，再用超純水沖洗至中性，最后用甲醇封存。

• 光源維護(hù)：

• UV 燈壽命約 2000 小時(shí)（氘燈），避免頻繁開(kāi)關(guān)（每次開(kāi)關(guān)相當(dāng)于消耗 2 小時(shí)壽命），長(zhǎng)期不用時(shí)每周開(kāi)機(jī)預(yù)熱 30 分鐘。

• 定期檢查燈能量（如 254 nm 處能量低于初始值的 50% 需更換），更換后需進(jìn)行波長(zhǎng)校正。

三、日常使用規(guī)范：減少損耗與故障

1. 開(kāi)關(guān)機(jī)順序

• 開(kāi)機(jī)：先開(kāi)計(jì)算機(jī)和檢測(cè)器，再開(kāi)泵和進(jìn)樣器，最后啟動(dòng)工作站軟件（按儀器品牌順序，如 Agilent 先開(kāi)泵，Waters 先開(kāi)軟件）。

• 關(guān)機(jī)：先將流速降至 0，關(guān)閉泵和檢測(cè)器，用流動(dòng)相平衡系統(tǒng) 30 分鐘后退出軟件，最后關(guān)閉電源（避免突然斷電損壞電子元件）。

2. 樣品前處理

• 所有樣品需過(guò)濾（0.22 μm 或 0.45 μm 濾膜），避免固體顆粒堵塞進(jìn)樣針或色譜柱篩板。

• 生物樣品（如血清、細(xì)胞裂解液）需先離心（10000 rpm，10 分鐘）并取上清液，必要時(shí)用蛋白沉淀法（如加乙腈沉淀蛋白）預(yù)處理。

3. 環(huán)境控制

• 實(shí)驗(yàn)室溫度保持在 20–25℃（溫差≤2℃/ 天），濕度 40%–70%，避免空調(diào)直吹儀器（防止冷凝水進(jìn)入電路）。

• 儀器需接地良好，遠(yuǎn)離強(qiáng)電磁干擾源（如離心機(jī)、大功率電機(jī)）。

四、定期維護(hù)計(jì)劃：預(yù)防性保養(yǎng)

五、常見(jiàn)故障預(yù)防與處理

1. 泵漏液：

• 原因：密封圈磨損、管路接口松動(dòng)、流動(dòng)相中有顆粒雜質(zhì)。

• 處理：更換密封圈，檢查管路并重新連接，過(guò)濾流動(dòng)相。

2. 進(jìn)樣后無(wú)信號(hào)：

• 原因：進(jìn)樣針堵塞、檢測(cè)器燈故障、流通池氣泡。

• 處理：超聲清洗進(jìn)樣針，更換氘燈，用甲醇沖洗流通池并排空氣泡。

3. 保留時(shí)間漂移：

• 原因：柱溫波動(dòng)、流動(dòng)相比例變化、色譜柱老化。

• 處理：檢查柱溫箱溫控精度，校準(zhǔn)泵的流量準(zhǔn)確性，活化或更換色譜柱。

4. 基線漂移：

• 原因：流動(dòng)相污染、檢測(cè)器未平衡、柱溫變化。

• 處理：重新配制流動(dòng)相，延長(zhǎng)檢測(cè)器預(yù)熱時(shí)間（至少 1 小時(shí)），穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)室溫度。

總結(jié)

液相色譜儀的保養(yǎng)需遵循 “預(yù)防為主，治未病” 原則，重點(diǎn)關(guān)注流動(dòng)相的純凈度、關(guān)鍵部件的清潔與潤(rùn)滑，以及嚴(yán)格的操作規(guī)范。通過(guò)定期維護(hù)和細(xì)致記錄（如建立儀器保養(yǎng)臺(tái)賬，記錄維護(hù)時(shí)間、更換部件、故障處理等），可顯著降低故障率，延長(zhǎng)儀器壽命，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。

液相色譜儀的正確使用方法