蛋白酶氫/氘交換質譜

蛋白酶氫/氘交換質譜檢測技術服務詳情介紹

氫/氘交換質譜（Hydrogen/Deuterium Exchange Mass Spectrometry，簡稱HDX-MS）是一種在結構生物學和生物化學中用于研究dànbáizhì結構和動態的強大工具。該技術基于dànbáizhì在溶液中氫原子與溶劑中的氘原子交換的能力。在dànbáizhì結構的表面或者部分暴露的氨基酸殘基的氫原子可以在一定條件下與溶劑中的氘原子交換。HDX-MS能夠提供關于dànbáizhì三維結構、折疊、相互作用、動態以及穩定性的信息。

一、實驗流程：

1、氫/氘交換： 將dànbáizhì樣品置于含有重水（D?O）的溶液中，允許dànbáizhì中的可交換氫原子（主要是胺基酸側鏈和脊椎氨基群的氫原子）與氘發生交換。

2、交換反應停止：

通過將樣品的pH值迅速降低并降低溫度（通常到0°C或更低）來減緩或停止氫/氘交換反應。

3、酶切： 使用蛋白酶（如yídànbáiméi）在低溫和低pH下迅速將dànbáizhì分解成肽段。這一步是在盡可能保留氫/氘交換水平的情況下進行的

4、質譜分析：

酶解得到的肽段通過液相色譜與質譜聯用技術（LC-MS）進行分析。在質譜圖中，氫/氘交換導致肽段的質量增加，通過測量質量的變化，可以推斷dànbáizhì各部分的氫/氘交換速率。

圖1

5、數據分析和解釋：

通過比較不同實驗條件（例如，存在或缺乏配體）下的氫/氘交換程度，可以獲得關于dànbáizhì折疊、動力學、相互作用界面以及配體結合對dànbáizhì結構的影響的見解。

二、應用：

1、dànbáizhì結構和動態：

HDX-MS可以揭示dànbáizhì不同區域的結構和動態信息，幫助理解dànbáizhì的折疊和運動。

2、dànbáizhì-dànbáizhì相互作用：

通過比較dànbáizhì在與其它分子相互作用前后的氫/氘交換模式的變化，可以找出dànbáizhì的相互作用區域和界面。

3、藥物發現：

HDX-MS可用于鑒定小分子與dànbáizhì相互作用的區域，進而在藥物發現中找出潛在的藥物靶點。

4、穩定性和構象變化：

通過分析dànbáizhì在不同條件下的氫/氘交換模式，可以了解其穩定性和構象變化。

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