用恒溫培養(yǎng)箱進行生鮮牛乳中體細胞的測定

1.原理

     將測試的生鮮牛乳涂抹在載玻片上成樣膜，干燥、染色，顯微鏡下對細胞核可被亞甲基藍清晰染色的細胞計數(shù)。

2.試劑

     除非另有說明，在分析中僅使用化學純和蒸餾水。

2.1乙醇，95%。

2.2四氯乙烷(Cz Hz Cl 4) 或三氯乙烷(C zHy Cl 3) 。

2.3亞甲基藍(Ci6HisCIN3S·3H2O) 。

2.4冰醋酸(CH3COOH) 。

2.5硼酸(H3BO3)。

3.儀器

3.1顯微鏡：放大倍數(shù)x500或×1000，帶刻度目鏡、測微尺和機械臺。

3.2微量注射器：容量0.01mLc

3.3載玻片：具有外槽圈定的范圍，可采用血球計數(shù)板。

3.4水浴鍋：恒溫65℃±5℃。

3.5水浴鍋：恒溫35℃±5℃。

3.6電爐：加熱溫度40℃±10℃。

3.7砂芯漏斗：孔徑≤10pm。

3.8干發(fā)型吹風機。

3.9電熱恒溫培養(yǎng)箱：恒溫40℃~45℃。

4.染色溶液制備

    在250mL三角瓶中加人54.0mL乙醇和40.0mL四氯乙烷，搖勻；在65℃水浴鍋中加熱3min， 取出后加入0.6g亞甲基藍， 仔細混勻； 降溫后， 置人冰箱中冷卻至4℃；取出后，加入6.0mL冰醋酸，混勻后用砂芯漏斗過濾；裝人試劑瓶，常溫貯存。

4.1采集的生鮮牛乳應保存在2℃~6℃條件下。若6h內(nèi)未測定，應加硼酸防腐。硼酸在樣品中的濃度不大于0.6g/100mL，貯存溫度2℃~6℃，貯存時間不超過24h。

4.2將生鮮牛乳樣在35℃水浴鍋 中加熱5min， 搖勻后冷卻至室溫。

4.3用乙醇將載玻片清洗后，用無塵鏡頭紙擦干，火焰烤干，冷卻。

4.4用無塵鏡頭紙擦凈微量注射器針頭后抽取0.01mL試樣，用無塵鏡頭紙擦干微量注射器針頭外殘樣。將試樣平整地注射在有外圍的載玻片上，立刻置于恒溫培養(yǎng)箱中，水平放置5mmin， 形成均勻厚度樣膜。在電爐上烤干， 將載玻片上干燥樣膜浸入染色溶液中，計時10min， 取出后涼干。若室內(nèi)濕度大， 則可用干發(fā)型吹風機吹干； 然后， 將染色的樣膜浸入水中洗去剩余的染色溶液，干燥后防塵保存。

5.測定

5.1將載玻片固定在顯微鏡的載物臺上，用自然光或為增大透射光強度用電光源、聚光鏡頭、油浸高倍鏡。

5.2單向移動機械臺對逐個視野中載玻片上染色體細胞計數(shù)，明顯落在視野內(nèi)或在視野內(nèi)顯示一半以上形體的體細胞被用于計數(shù)，計數(shù)的體細胞不得少于400個。

• 科研電熱恒溫培養(yǎng)箱

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• 雙列八孔電熱恒溫水浴鍋

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