ABC-ELISA材料和方法

BAS酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)材料和方法

（以篩選抗空腸彎曲菌共同抗原的單克隆抗體為例）

1 材料 

（1） 空腸彎曲菌共同抗原提取物，自制。 

（2） 生物素化羊抗鼠IgG（BSAMG），衛(wèi)生部上海生物制品所。 

（3） ABC試劑，衛(wèi)生部上海生物制品所。如ABC試劑需自己配制，可按說明要求，將親和素與酶標(biāo)生物素按一定比例混合，置37℃孵育30min后使用。 

（4） 被檢雜交瘤培養(yǎng)物上清液。 

（5） 其他試劑及器材同常規(guī)ELISA法。 

2 方法ABCELISA間接法程序 

（1） 用包被液對空腸彎曲菌共同抗原提取物作適當(dāng)稀釋（1∶16），加入反應(yīng)孔中，每孔01ml，置4℃包被過夜或37℃1～2h。 

（2） 用洗滌液洗滌2次，每次1min，瀝干。 

（3） 加入雜交瘤培養(yǎng)物上清液，每孔01ml。同時(shí)作BALB/C小鼠免疫血清（陽性）及正常血清和培養(yǎng)液（陰性）對照，置37℃1～2h。 

（4） 洗滌3次，方法同上。 

（5） 用保溫液對生物素化羊抗鼠IgG作適當(dāng)稀釋（1∶400～1∶1000），加入反應(yīng)孔中，每孔01ml。置37℃孵育1h。 

（6） 洗滌3次，方法同上。 

（7） 用ABC稀釋液或保溫液對ABC試劑作適當(dāng)稀釋（1∶100），加入反應(yīng)孔中，每孔01ml。置37℃孵育30min。 

（8） 洗滌3次，方法同上。 

（9） 加入鄰苯二胺底物溶液，每孔01ml，置暗盒內(nèi)室溫顯色適當(dāng)時(shí)間（30min）。 

（10） 加入2mol/L H2SO4，每孔005ml，終止反應(yīng)。用酶聯(lián)檢測儀檢測結(jié)果，并記錄其OD值。

3 結(jié)果判定以P/N≥2為陽性，或根據(jù)自定標(biāo)準(zhǔn)判定。 

4 注意事項(xiàng) 

1 ABCELISA中各要素的*反應(yīng)條件需經(jīng)篩選后確定，不能照搬常規(guī)ELISA的反應(yīng)條件。 

2 ABCELISA對抗原和抗體（或免疫血清）的質(zhì)量要求高，否則可造成較高的本底或背景顯色。