　　將嗜熱芽孢桿菌紙片用無菌鑷子放人密封試管中。化學指示卡和留點溫度計放人敞口的試管中。上兩種試管各準備5—10份。分別放置在高壓滅菌器蒸汽口處、底部排氣口處及底部水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層，則需放10處】。留點溫度計標化合格后可用于驗證試驗。檢測前，需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。

　　每次監測后留點溫度計的溫差應在1oC之間，則說明滅菌器內的溫度分布是均勻的。滅菌后的菌片應在嚴格無菌操作條件下放人滅菌后的溴甲酚紫胨水培養基內。56—60~C培養2448小時，觀察顏色變化。如培養基變為黃色，說明菌片中的嗜熱芽孢桿菌尚未*滅活，細菌仍可在培養基中生長，分解葡萄糖產酸變為黃色。如培養基顏色不變化仍為紫色，則說明芽孢菌已滅活。

　　同時要用未經滅菌的紙片放人培養基內作為陽性對照，不加紙片的空白培養基作為陰性對照。化學指示卡上的指示色塊，在高壓蒸汽滅菌時，由淡黃色變為黑色。隨著顏色變化的深淺，并與對照色相比，可判斷滅菌效果是否達到要求。

　　化學指示卡應在干燥處保存。遇潮會變色，影響滅菌效果的觀測。高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進入滅菌器內，與滅菌物品接觸，并將原有的冷空氣排出方可達到滅菌的效果。要進行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。

　　二種驗證各重復三次，共做六次見表。5個點六次試驗表明溫度均在121 oC，化學指示卡變黑；程度與對照色一致；培養基均未改變顏色，說明高壓蒸汽滅菌效果合格。

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