賽多利斯Octet® 非標記分子互作分析系統和Incucyte® 實時活細胞分析系統相關文獻均超過了15,000篇，得到了市場和用戶的廣泛認可。Octet® 是揭示分子機制和藥物表征的基本手段，而Incucyte® 可以大大增加體外細胞學實驗的便捷性和準確性。

那么，當這兩種技術結合使用時，會擦出什么樣的火花呢？今天，陳老師將解析最近一個月內關于這兩種技術聯合應用的優秀文章，這些研究涵蓋了小分子研究、抗體藥物發現、再生醫學、蛋白質設計等多個領域。

分子膠是一類小分子化合物，它們能夠同時結合目標蛋白和降解機制涉及的酶，形成三元復合物。P53是一個關鍵的腫瘤抑制蛋白，它通過特定的E3連接酶泛素化而降解。與P53和DUBs（去泛素化酶）結合的分子膠可能通過去泛素化來穩定P53。復旦大學魯伯塤組研究人員篩選出了幾種可能與P53和DUBs（特別是USP7）結合的潛在分子膠。其中包括溴隱亭（BC，4L10），是一種FDA批準的藥物。進一步的研究驗證了BC與USP7結合從而增加P53的穩定性的機制。BC通過降低P53的降解，在體外抑制癌細胞的增殖，并在異種移植模型中抑制腫瘤生長。Octet® 和Incucyte® 是本篇文章用于藥物表征的重要手段。

圖1. Octet® 顯示幾種分子膠與P53和USP7的平衡解離常數KD在μM級別

圖2. Incucyte® 結果顯示：如果USP7或者P53基因突變后（圖2c, 2d左），BC對HeLa細胞的增殖抑制能力減弱了（相對圖2d右），進一步說明BC的機制特異性；每隔六個小時拍攝一次，每次拍攝四個視野計算細胞匯合度

CAR–T細胞療法在實體瘤的治療上仍需進一步優化。本文開發了一種新型的強效和持久的CAR（嵌合抗原受體），它整合了T和NK細胞共刺激因子TMIGD2的結構域，以及針對B7-H3（一個在實體腫瘤表達的免疫檢查點）的IgV結構域的單克隆抗體。在體內外實驗中，相較于第二代和第三代共刺激因子CAR，B7-H3.TMIGD2的CAR-T細胞顯示出更優越的抗腫瘤活性、存活率和持久性。從機制上看，B7-H3.TMIGD2 CAR-T細胞能夠維持線粒體代謝，產生較少的細胞因子，并建立較少的耗竭細胞、更多的中央記憶細胞，以及更高的CD8/CD4 T細胞比例。這為實體瘤的治療提供了新的可能性和希望。在本研究中，Octet® 是抗體篩選的主要手段，而Incucyte® 則是體外細胞學實驗的主要手段之一。

表1. 用Octet® 篩選出單克隆抗體8B12，其與B7-H3的親和力更強

圖3. Incucyte® 結果顯示：B7-H3.TMIGD2 CART對腫瘤細胞系U118，HCC827的殺傷作用；每隔4個小時拍著一次，一共拍攝112個小時

Integrin α5β1在細胞附著和遷移過程中起著至關重要的作用，尤其是在發育和組織再生過程中。所以，針對α5β1的結合蛋白在再生醫學和下一代治療領域具有巨大的潛力。利用計算蛋白質設計技術，研究人員成功創建了名為NeoNectins的α5β1特異性結合微蛋白。這些NeoNectins能夠與α5β1結合并穩定其開放狀態，從而優化其功能。將NeoNectins固定在鈦表面和3D水凝膠中時，發現它們在促進細胞附著和擴展方面，表現優于天然纖維連接蛋白和RGD肽。此外，在動物模型中，NeoNectin涂層的鈦植入物在促進組織整合和骨生長方面，也顯著優于纖維連接蛋白和RGD涂層的植入物。無論是作為治療劑、細胞培養基還是組織修復材料，NeoNectins都有可能為未來的醫學研究和治療帶來革命性的變化。在本研究中，Octet® 被用來結合微蛋白與靶點在不同條件下的結合能力，Incucyte® 則用來檢測細胞遷移速度。

圖4. Octet® 檢測NeoNectins與α5β1的親和力（圖4A），兩者親和力在pH5的時候親和力降低（圖4B），如果分析緩沖液中去掉鈣鎂離子，則幾乎沒有結合（圖4C）

圖5. Incucyte® 檢測細胞運動軌跡，發現加入NeoNectins后，細胞運動速度變低

當人體缺乏維生素B12時，可能會導致一系列神經缺陷，包括協調能力的喪失和認知能力的下降。本文利用可編程噬菌體展示技術，在一位出現進行性震顫和共濟失調的患者中，識別出了一種針對CD320的自身抗體。這種自身抗體通過耗盡細胞表面的B12受體CD320，在體外實驗中阻礙了B12的攝取。盡管該患者的血清中維生素B12的濃度正常，但在她的腦脊液（CSF）中，B12幾乎無法檢測到。接受免疫抑制治療和B12補充治療后，該患者的腦脊液中B12水平有所升高，且臨床狀況得到改善。這一發現提示，通過針對自身抗體和營養補充的治療，可能有助于改善由維生素B12缺乏引起的神經系統問題。在本研究中，Octet® 被用來驗證抗體的結合，而文中大量的B12攝入實驗是通過Incucyte® 完成的。

圖6. Octet® 結果顯示：病人中分離的CD320的自身抗體與CD320的多肽結合，但是不與突變的CD320多肽結合

圖7. Incucyte® 檢測細胞對B12的攝入。加入病人腦脊液（CSF）或者CD320抗體，B12的攝入量變低（D圖）。對腦脊液中的CD320抗體進行去除或者富集，分別可以增加或者抑制B12的攝入（E圖）。

Incucyte® 的主要優勢

• 培養箱內可長達數周的連續觀察，最短幾分鐘間隔拍攝，減少人力，防止過多操作對細胞的傷害

• 多個板位，分別獨立設置檢測程序，可以兼容各種孔板和培養皿，通量高

• 具有劃痕、腫瘤球、類器官、趨化、血管生成等多個分析拍攝模塊，并配套相應的耗材

• 高效簡便的模塊化軟件設置和數據分析，輸出圖片、視頻、生長曲線等多指標多參數，使得結果更加準確

• 大于100種優化過的活細胞專用熒光試劑、耗材及詳盡的Protocol

• 文章數>15,000篇，認可度廣

Octet® 的主要優勢

• 非標記Direct Binding是趨勢，它的結果更準確

• 快速測定親和力，更加定量化對互作進行表征

• 無洗滌步驟，可測弱親和力（解離快）

• 測試時間短，一般10-20分鐘，更快拿到結果

• 實驗形式多樣化：定性，兩者結合，協同/競爭實驗，垂釣

• 寫入了美國藥典，文章>15,000篇，認可度廣

• 萬金油技術，可以用與檢測DNA、小分子、蛋白等各種生物分子

• 使用方便，成本相對低

鎖定Octet® 和Incucyte® 這對CP，讓您的文章更上一層樓！

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