非洲豬瘟病毒檢測實操方案

非洲豬瘟（African swine fever, ASF）是由非洲豬瘟**感染家豬和野豬后產生的一種烈性傳染疾病。此疫情從2018年8月傳入我國后，迅速大范圍蔓延，截至今日，已席卷大半個中國，對養豬業造成了重大的威脅和不可估量的經濟損失。

非洲豬瘟**是一種具有囊膜結構的雙鏈DNA**，感染家豬和野豬后引起高熱、出血和高死亡率。PCR方法由于具備高靈敏度、高特異性和快速的特點，被用于非洲豬瘟**的檢測。
      下面結合實際操作應用，跟大家分享一套可靠的非洲豬瘟**檢測方案。

                              非洲豬瘟感染組織樣本和蜱類樣本的前處理

      非洲豬瘟易感的對象主要包括家豬，野豬和蜱，通常采集的樣品為血液、組織和蜱三類。對于組織樣本和蜱，在核酸提取前需要對樣本進行充分的破碎，使其核酸充分地釋放出來，才能進行后續的檢測和診斷。

MM400高通量組織研磨儀可對非洲豬瘟感染動物組織或蜱進行充分破碎、混合、均質化

德國萊馳（RETSCH）MM400研磨儀可謂是組織樣本前處理界的專家，也是各實驗室樣品粉碎的“多面手”，深受各行業用戶的喜愛和信賴。其對于動植物組織的細胞破碎可同時處理多達10、20、48、192個樣品，典型樣品如：各種動物組織、植物組織、細菌、酵母等樣本。研磨中樣品管獨立且密封，無需擔心交叉污染問題，保證您的樣本安全。典型研磨時間30s-2min，可處理樣品，提高工作效率。

                     MM400冷凍混合研磨儀

                           MM400冷凍混合研磨儀部分配件

具體豬瘟感染組織類研磨方案可參考以下步驟


                                          MM400冷凍混合研磨儀實驗


               
                    豬瘟**的檢測——PCR方法
 

1、研磨后的樣品，離心后取上清液200ul，進行核酸純化；
2、PCR法檢測ASFV**

       現行ASFV（非洲豬瘟**）主要實驗室檢測方式分為ASFV**檢測和ASFV抗體檢測。在所有方法其中很受關注的是PCR法，PCR已成功應用于豬樣品（血液、器官、肉制品等）和蜱中ASFV基因組的檢測。ASFV為DNA**，核酸穩定性高，所有經過驗證的PCR技術均可以在活體豬臨床癥狀出現前實現檢測。PCR是可以代替**分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV 檢測技術。同時，相比于抗原檢測技術，如酶聯免疫吸附試驗（ELISA），PCR具有更高的敏感性和特異性。PCR技術本身還分為成本較低的普通PCR電泳法和速度更快的實時熒光PCR法（qPCR）。

      OIE 在《陸生動物診斷試驗和疫苗手冊》（2016年）中推薦使用的常規和實時熒光PCR得到了長期的充分驗證，是常規診斷的重要工具。引物和探針多以VP72編碼區域作為靶基因設計，同樣可檢測的編碼**結構蛋白基因還有p54、K205R等，基因越穩定、在宿主體內復制轉錄越早則越適合作為PCR靶基因。

      對于特急性、急性或亞急性ASF感染病例，PCR是優選的檢測技術。
德國RETSCH實驗室可為感興趣的老師提供樣機，歡迎垂詢！