發酵罐在滅菌的時候需要注意什么

 

發酵罐操作與滅菌技術   常用的滅菌技術一般分為；物理滅菌和化學滅菌。物理滅菌又包括濕熱滅菌、干熱滅菌、射線滅菌法和過濾滅菌等。而化學滅菌主要是使用化學試劑（如甲醛、苯酚、新潔爾滅、過氧乙酸、高錳酸鉀等）進行某些容器或物料以及無菌區域的滅菌。在生物發酵方面，常用的設備是機械攪拌式發酵，其殺菌效果的好壞直接影響到發酵是否能正常進行。由于工業操作的特點，發酵罐滅 菌普遍采用濕熱滅菌法。  一．小型發酵罐操作和酵母菌培養  實驗室所使用的小型通氣攪拌發酵罐具有體積小，耗電少，不宜染菌，單位時間、單位體積的生產力高，代謝放出熱量易于移去，操作控制和維修方便等特點，因此能較好的滿足微生物的生長和代謝的需要。 1.設備和材料  1L發酵罐、5L發酵罐、50L發酵罐、一套空氣除菌系統、供檢查無菌用的肉湯培養基和裝置。 2.發酵罐操作步驟 2.1發酵罐的清洗  發酵罐使用前后都應認真清洗，特別是前后兩次培養采用不同的菌株時，更應注意清洗和殺菌工作。  發酵罐內可進行清洗的任何部分都應認真清洗，否則都可能成為雜菌的滋生地。易被忽略而不能充分清洗的地方有噴嘴角內部與取樣管內以及罐頂等處。 2.2 種子培養基及培養條件  蛋白胨10g，葡萄糖40g，蒸餾水100ml，pH自然。500ml三角瓶裝液量100ml，115℃，滅菌20min。  培養條件：用接種環從保存斜面中接一環至三角瓶中，150r/min，28℃，搖瓶培養48h。  2.3 發酵罐的組裝工作  ① 連接好冷卻水管。若采用自來水冷卻，連接部要充分牢固，并且注意連接管管徑與自來水管管徑一致，盡可能采用耐壓管。  ②由于通入的空氣有一定壓力，應注意連接壓縮空氣的管子應能承受一定壓力。 

 

③安裝pH及溶解氧等檢測裝置，注意各接線口不要出現差錯。由于操作過程要和水打交道，故線路連接一定要注意安全，要特別注意防止漏電。 2.4 發酵罐滅菌  ① 排氣管為玻璃管，內裝有棉花，以保證蒸汽能自由出入發酵罐，同時不會出現染菌現象。  ② 取樣口上連接一段硅膠管，在硅膠管上安裝節流夾，以防止培養基在滅菌是流出。  ③ 裝入發酵罐溶積60%的培養基（成分同種子培養基）后，將發酵罐放入滅菌釜內，在115℃下，滅菌20min。當滅菌完成后，溫度降到60℃以下時，打開滅菌釜，確認發酵罐上所連接的管路完好后，將罐去除。盡快將通氣管接好，確認排氣口正常后，以0.3-0.5L/min通入空氣。接通冷卻水管路，開攪拌在低速下進行培養基的冷卻。 2.5   取樣與分析方法  自培養操作開始起，每3h取一次樣。取樣時，將取樣管口流出的初15ml左右培養液作為廢液，取隨后流出的培養液10ml，在OD505下測定吸光度。所得數值基于已制得的菌體量與吸光度之間的曲線，換算出菌體濃度。 二  發酵菌的空消技術  1 發酵罐的清洗  打開罐底排污閥，用冷水沖洗罐壁，如壁內壁有沉積物，操作人員必須下罐進行人工鏟除，否則易包藏雜菌成為污染源。進罐清洗必須兩人進行，一人進罐清洗，一人在外監護。同時與罐體相連的取樣管道，進料管道，排污管道及有關閥門都要通水沖洗干凈，通以沸水，以提高洗滌效率，洗完后蓋上入孔蓋。  ① 發酵罐空消操作  ② 打開罐頂各排汽閥，開三路進汽（罐底、風管、取樣管）。  ③ 開始時，蒸汽以下進上出為主，蒸汽由罐底和風管進入，由罐頂所有排汽閥排出冷空氣。在蒸汽排出時，即關閉各閥門，稍開排汽閥，當罐壓上升到1.5-2.5kgf/cm2(1kgf/cm2=98.0665kpa)時，開罐頂各排汽閥，排汽歷時 15-20min，蒸汽改為上進下出為主，即關閉底部蒸汽閥，關小進風管汽閥，蒸汽主要從取樣管進，連消進料管進入，空消過程中蒸汽應將兩只大罐間倒種管道、壓料進風管道、接種管道以及各排汽閥打開，排汽消毒（兩個沖視鏡閥開啟短暫時間即可）。