2019年3月1日，美國食品和藥物管理局(FDA)在發(fā)布血管緊張素II受體阻滯劑（ARBs）藥物氯沙坦的自愿召回公告，涉及到印度Hetero Labs Ltd.生產的87批氯沙坦鉀片，而導致該召回的主要原因是發(fā)現其中含有N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質。由于NMBA是已知動物和潛在人類的致癌化學物質，是繼N−亞硝基二jia胺（NDMA）和N−亞硝基二乙胺（NDEA）之后上市ARBs藥物中檢測到的第三種亞硝胺類遺傳毒性雜質。此后，FDA相繼公布了Teva Pharmaceuticals和Vivimed Life Sciences Pvt Ltd等制藥公司自愿召回涉及氯沙坦鉀的63批藥品，其原因為檢出含有NMBA。同時，加拿大衛(wèi)生部（HC）及英國衛(wèi)生部（DHSC）也在上發(fā)布了氯沙坦類藥物的召回公告。直至2019年6月12日，Teva Pharmaceuticals仍在擴大自愿召回7批檢出NMBA氯沙坦鉀片，可見藥物中的遺傳毒性雜質仍受到公眾及藥品監(jiān)管機構的高度關注。

 

在FDA已公布的ARBs藥物亞硝胺雜質限度表中，NMBA的日允許攝入量大值為0.96ppm。 FDA評估了暴露于9.82ppm水平NMBA相比于終生暴露于0.96ppm NMBA的服藥水平，表明6個月的暴露量不會存在患癌風險。

N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）
N-Nitroso-N-methyl-4-aminobutyricacid(NMBA)
CAS. 61445-55-4

　　因此，為了確保患者在緩沖期可獲得氯沙坦類藥物，FDA不反對含NMBA低于9.82ppm的氯沙坦保持銷售。該過渡緩沖期FDA設為6個月，直至生產企業(yè)提供亞硝胺雜質符合要求的氯沙坦藥物來填補市場。

目前，關于氯沙坦鉀中NMBA的檢測方法尚未見公開報道，為及時應對市場檢測需求，島津中國推出了基于LC-MS/MS技術的檢測方法，該方法操作簡單，靈敏度高，適用性強，可有效用于氯沙坦鉀中NMBA的分析檢測。

1、 實驗部分

1.1 儀器： LCMS-8050三重四極桿質譜儀聯用儀，含有：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5R在線脫氣機，SIL-30AC自動進樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統控制器，LCMS-8050三重四極桿質譜儀，LabSolutions（Version 5.82 SP1）色譜工作站。

1.2 分析條件：

液相色譜條件

色 譜 柱	：Shim-pack XR-ODS II 2.0 mm I.D.× 100 mm L., 2.2 μm
流 動 相	：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-甲醇
流 速	：0.3 mL/min	柱溫	：40℃
進樣體積	：2 µL	洗脫方式	：梯度洗脫

 

質譜條件

離子化模式	：ESI，正離子檢測	碰撞氣	：氬氣 270 kPa
霧化氣流速	：3.0 L/min	加熱模塊溫度	：400℃
加熱氣流速	：10.0 L/min	干燥氣流速	：10.0 L/min
接口溫度	：300℃	掃描模式	：多反應監(jiān)測(MRM)
DL溫度	：250℃	MRM參數	：見下表

 

1.3 標準品溶液：取NMBA標準貯備液，以純甲醇逐級稀釋為0.5、1、2、5、10、20、50、100 ng/mL的八個不同濃度的混合標準工作溶液。

1.4 樣品溶液：取氯沙坦鉀三批原料藥（符合EP9.0）0.1 g于10 mL容量瓶中，加甲醇適量，超聲1 min至全部溶解，放冷至室溫，用甲醇定容待測。

2、 結果

2.1標準品色譜圖

圖1. NMBA標準品色譜圖（100 ng/mL）
（黑色-總離子流；粉色-MRM147.15/117.10；藍色-MRM147.15/87.10；棕色-MRM147.15/44.10）

2.2 線性關系及檢出定量限

圖2. NMBA標準曲線
檢出限（LOD）0.5 ng/mL(MRM147.15/117.10)，定量限（LOQ）1.0 ng/mL (MRM147.15/117.10)

2.3 精密度實驗：10 ng/mL標準溶液為樣本連續(xù)進樣，日內及日間保留時間相對標準偏差低于0.1%，峰面積低于1.10%。

2.4 加標回收實驗

取0.1 g氯沙坦鉀樣品于10 mL容量瓶中，加入NMBA標準品溶液(相當于50、100、200 ng NMBA標準品)，按照1.4中的方法進行處理，上機分析。加標的氯沙坦鉀溶液色譜圖（以200 ng加標量為例）見圖3。三個平行樣品的低中高平均回收率分別為98.04%，94.40%，95.61%。

圖3 NMBA加標量為200 ng時氯沙坦鉀溶液色譜圖

2.5 檢測結果：三批樣品中NMBA均低于小檢出限（LOD）。

3、 結論

　　本工作建立了使用LCMS-8050三重四極桿質譜聯用儀測定氯沙坦鉀原料藥中N-亞硝基-N-甲基-4-氨基丁酸（NMBA）雜質的方法，在0.5~100 ng/mL濃度范圍內線性關系良好，檢出限和定量限分別為0.5 ng/mL和1.0 ng/mL。使用此方法對三批次氯沙坦鉀原料藥進行了測定，結果為NMBA未檢出。本方法簡單、快速、靈敏、準確，可有效用于氯沙坦鉀原料藥中NMBA的分析檢測。