摘要：本應(yīng)用簡報介紹了一種定量測定芝麻醬中 26 種真菌毒素的方法，該方法基于 Liu 等人發(fā) 表的論文 [1]。首先使用實驗室開發(fā)的改良 QuEChERS 方案對樣品進(jìn)行萃取和凈化，然后 用 Agilent 1290 Infinity 液相色譜系統(tǒng)串聯(lián) Agilent 6460 三重四極桿質(zhì)譜儀對所得的溶液 進(jìn)行分離和檢測。本文開發(fā)的方法經(jīng)過基質(zhì)匹配外標(biāo)校準(zhǔn)，具有非常出色的線性動態(tài)范 圍，相關(guān)系數(shù)達(dá)到 0.995 或更高。利用該方法檢測了 26 種真菌毒素，其定量限 (LOQ) 幾 乎均低于當(dāng)前中國、歐盟及其他監(jiān)管機構(gòu)規(guī)定的相應(yīng)最大殘留水平 (MRL)。加標(biāo)實驗表 明，大多數(shù)回收率都在 60% - 120% 的范圍內(nèi)，各種分析物的 RSD 均低于 15%。本研究 開發(fā)的方法具有*的靈敏度、選擇性和準(zhǔn)確度，并且具有較高的通量，適用于對實際 樣品中的真菌毒素進(jìn)行目標(biāo)物篩查。

前言：各種農(nóng)產(chǎn)品（包括原材料和加工后的食品）容易受到真菌毒素的 污染，在適宜的氣候條件下，真菌毒素主要由曲霉屬、青霉屬、 鐮刀菌屬以及許多其他真菌物種分泌產(chǎn)生。這些真菌毒素多數(shù)都 含有ju毒，甚至具有致癌性 [2,3]。目前，真菌毒素已受到許多機 構(gòu)的監(jiān)管，尤其是在主要農(nóng)產(chǎn)品（例如，谷物、玉米、牛奶和食 用油）中 [4]。食品中真菌毒素的常規(guī)監(jiān)測需要采用極其靈敏且可 靠的方法。 過去十年間，高效液相色譜與質(zhì)譜尤其是串聯(lián)質(zhì)譜的聯(lián)用系統(tǒng) (HPLC-MS/MS) 通過與免疫親和凈化 (IAC) 或固相萃取 (SPE) 相 結(jié)合，已被應(yīng)用于真菌毒素的檢測中。QuEChERS 是一種更通用 的萃取和凈化方法，該方法已被擴展至分析一些常見食品基質(zhì) （例如，小麥、面粉、谷物、葡萄酒等）中的真菌毒素 [5-7]。然 而，芝麻醬作為另一種更加復(fù)雜的食品基質(zhì)，尚未得到深入分析。 芝麻醬主要由芝麻和花生制成，容易受到多類真菌毒素的污染， 從而可能導(dǎo)致人類健康風(fēng)險的增加。這種醬富含脂肪、碳水化合 物、蛋白質(zhì)和天然色素，因此很難凈化。本研究的目的是通過結(jié) 合通用的 QuEChERS 方法與超高效液相色譜/質(zhì)譜串聯(lián)系統(tǒng) (UHPLC-MS/MS)，開發(fā)出一種可靠的方法，對芝麻醬中的 26 種 常見真菌毒素進(jìn)行高通量測定。

實驗部分 材料和試劑 真菌毒素標(biāo)準(zhǔn)化合物：新茄病鐮刀菌烯醇 (NEO)、嘔吐毒素 (DON)、3-乙酰基-脫氧雪腐鐮刀菌烯醇 (3-ADON)、15-乙酰基-脫 氧雪腐鐮刀菌烯醇 (15-ADON)、黃曲霉毒素 B1 (AFB1)、黃曲霉毒 素 B2 (AFB2)、黃曲霉毒素 G1 (AFG1)、黃曲霉毒素 G2 (AFG2)、 黃曲霉毒素 M1 (AFM1)、黃曲霉毒素 M2 (AFM2)、T2 毒素、HT-2 毒素、伏馬菌素 B1 (FB1)、雜色曲霉素 (ST)、疣孢青霉原 (VER)、 赭曲霉毒素 A (OTA) 和玉米烯酮 (ZEN) 購自 Alexis Corporation； 4,5-二乙酰氧基鐮草鐮刀菌醇 (DAS)、鐮刀菌烯酮-X (FUS-X)、脫環(huán) 氧-嘔吐毒素 (DOM-1)、膠霉毒素 (GLT)、煙曲霉素 (FUM)、伏馬 菌素 B2 (FB2)、伏馬菌素 B3 (FB3)、霉酚酸 (MPA) 和蕈青霉素 (PAX) 購自 Romer Lab。一些試劑（例如甲醇、乙腈、甲酸、乙 酸銨和水）為 HPLC 級。其他試劑均為分析純級并購自本地供應(yīng) 商。定制的 QuEChERS 萃取（EN15662 方法）試劑盒和分散凈 化管均購自安捷倫科技公司。 樣品萃取和凈化 稱取樣品 (2.5 g) 加入 50 mL 離心管中，并采用兩種不同的溶液依 次對樣品萃取 30 分鐘：20 mL 含 0.1% 甲酸的 80% 乙腈水溶液和 5 mL含 0.1%甲酸的 20%乙腈水溶液。在每次萃取后，均對樣品瓶 進(jìn)行離心，并收集上清液。然后將兩次收集的上清液混合在一起， 并使用安捷倫 QuEChERS 萃取試劑盒（部件號 5982-5650CH） 通過立即渦旋振蕩 1 分鐘后在 8000 rpm 下離心 5 min 以進(jìn)行鹽析。 然后將上清液轉(zhuǎn)移至潔凈的樣品瓶中，并使用 20 mL 正己烷進(jìn)行 萃取，除去脂質(zhì)。將保留在下層的分析物轉(zhuǎn)移至包含 150 mg C18 和 900 mg 硫酸鎂的安捷倫 dSPE 凈化管（部件號 5982-4956CH） 中。渦旋振蕩渾濁溶液 1 min，然后進(jìn)行離心。將所得上清液倒 入潔凈的分散管中，該分散管依次用 5 mL 乙腈清洗兩次。然后將 流過的溶液與清洗溶液混合，并使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在 40 °C 下將其蒸 干。最后，將殘渣依次溶解于 1.5 mL 甲醇和 1.0 mL 水中。將所得 到的溶液通過 0.22 µm 濾膜，以便采用 UHPLC-MS/MS 進(jìn)一步 分析。

結(jié)果與討論 UHPLC-MS/MS 條件的優(yōu)化 首先將標(biāo)準(zhǔn)化合物進(jìn)樣至質(zhì)譜儀以確定 MS 采集參數(shù)，見表 2。 將真菌毒素分為兩組，一組在正離子化模式下進(jìn)行分析，另一組 在負(fù)離子化模式下進(jìn)行分析。如圖 1 所示，在優(yōu)化的 UHPLC 條件下，分別在正離子化模式和負(fù)離子化模式下進(jìn)行分析的兩組真 菌毒素均得到了*的基線分離。這一分離結(jié)果避免了分析物的 相互干擾，并且還降低了基質(zhì)本身的干擾效應(yīng)。與必須采用折中 的 HPLC 條件（流動相、梯度曲線）的極性切換方法相比，將真 菌毒素分為正離子化和負(fù)離子化兩組單獨進(jìn)行分析能夠使這 26 種 真菌毒素獲得更高的靈敏度。