摘要：本應(yīng)用簡報描述了使用快速、簡便、經(jīng)濟(jì)、高效、耐用和安全 (QuEChERS) 的 AOAC 樣品制備方法來萃取和凈化雞肉中多種農(nóng)藥類型典型代表的 12 種農(nóng)藥殘留。早期的 AOAC方法采用了在水/乙腈緩沖系統(tǒng)中進(jìn)行的初萃取、加入鹽分后的萃取/分離步驟，以及使用分散固相萃取 (dispersive SPE) 的凈化步驟。然后通過液相色譜與在陽離子多反應(yīng)監(jiān)測(MRM) 模式下操作的電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜儀 (LC/ESI/MS/MS) 進(jìn)行聯(lián)用，來確定雞肉提取物中是否存在目標(biāo)農(nóng)藥?；厥章蕦?shí)驗(yàn)的加標(biāo)水平為 10 和 50 ng/g。平均回收率在76% 至 107% 范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 RSD 低于 10%。

 

前言AOAC QuEChERS 方法廣泛應(yīng)用于食品中的農(nóng)藥分析 [1,2]。本方法采用乙腈提取，然后利用無水硫酸鎂 (MgSO4) 將樣品中的水進(jìn)行鹽析分離，以醋酸鹽緩沖液誘導(dǎo)分離。而凈化方面，本應(yīng)用選擇了其他食品方法中所用的 Agilent 分散 SPE 試劑盒。這類試劑盒的樣品容量為 8 mL，含 900 mg MgSO4，在每毫升乙腈提取物中加入 150 mg C18。在本研究中，分析 12 種農(nóng)藥以便于對適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut AOAC 緩沖提取試劑盒和Bond Elut QuEChERS 分散 SPE 試劑盒的性能進(jìn)行評估。該方法已通過分析物回收率和重現(xiàn)性驗(yàn)證。表 1 所示為雞肉中農(nóng)藥的化學(xué)和法規(guī)信息。

 

實(shí)驗(yàn)部分所有試劑和溶劑均為 HPLC液相色譜儀 或分析純級。甲醇 (MeOH) 和乙腈(ACN) 購自 Honeywell（美國密歇根州馬斯基根）。甲酸 (FA) 購自 Fluka（德國施泰因海姆）。農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品購自西格瑪奧德里奇公司（美國密蘇里州圣路易斯）。內(nèi)標(biāo)物（磷酸三苯酯，TPP）來自安捷倫科技公司（美國特拉華州威爾明頓）。標(biāo)準(zhǔn)品和內(nèi)標(biāo) (IS) 儲備液（除多菌靈為 0.5 mg/mL 之外，其它均為2.0 mg/mL）分別用含甲醇和 0.1% FA 的乙腈或二甲基亞砜制備，并在 –20 °C 下保存。兩份濃度為 0.5 和 2.5 µg/mL 的 QC 加標(biāo)溶液用含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水每日現(xiàn)場制備。將等量的 2.5 µg/mLTPP 加入到含 0.1% FA 的 1:1 乙腈:水中作為 IS 加標(biāo)溶液。

 

儀器和材料• Agilent 1200 Infinity 系列• 電噴霧離子化 Agilent 6460 三重四極桿 LC/MS 系統(tǒng)• Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒（部件號 5982-5755CH）• 適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS 分散SPE 試劑盒（部件號 5982-4956CH）• Eppendorf 微量離心管（Brinkmann 儀器，美國紐約州韋斯特伯里）• 飛鴿離心機(jī)（安亭科學(xué)儀器，中國上海）

 

HPLC 條件色譜柱： Agilent Poroshell 120 EC-C18，2.1 × 100 mm，2.7 µm（部件號 695775-902）流動相： A：0.1% 甲酸 (FA) 的水溶液B：0.1% FA 的乙腈溶液進(jìn)樣量： 5 µL流速： 0.4 mL/min梯度： 時間 (min) %B0 51 53 507 908 908.2 59 5溫度： 30 °C后運(yùn)行： 2 min總運(yùn)行時間： 11 minMS 條件氣體溫度： 350 °C氣體流速： 10 L/min霧化器壓力： 40 psi毛細(xì)管電壓： 3500 V農(nóng)藥在正離子模式下進(jìn)行監(jiān)測。分析物的其他條件見表 2。

 

樣品前處理雞肉購自當(dāng)?shù)厥袌?。將肉切成小塊，置于潔凈的塑料袋中，并在–20 °C 下冷凍過夜。第二天只取需用量的冷凍雞肉，并充分混勻。將樣品*粉碎，制得均質(zhì)樣品。確保所得的最終樣品中無明顯可見的雞肉塊。萃取/分離取 5 g (± 0.1 g) 均質(zhì)樣品放入 50 mL 離心管中。采用 100 µL QC加標(biāo)溶液制備 QC 樣品。在對照空白樣品外的其余所有樣品中均加入內(nèi)標(biāo)加標(biāo)溶液 (100 µL)，制備內(nèi)標(biāo)濃度為 50 ng/g 的樣品溶液。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的水 10 mL。蓋上離心管，渦旋振蕩 1 min。利用分液器向每個離心管中加入等量的 15 mL 乙腈（含 0.1% 乙酸）。蓋上離心管，手動振搖 1 min。向每個離心管中直接加入 Bond ElutQuEChERS AOAC 萃取鹽包（含無水硫酸鎂 6 g 和醋酸鈉 1.5 g）。蓋緊離心管，手動劇烈振搖 20 s，確保溶劑與所有樣品充分混合，結(jié)晶聚集物*打碎。最后將樣品離心管以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 5 min。

 

 

分散固相萃取的凈化從離心管中吸取 8mL乙腈上清液，移至 15mLBond ElutQuEChERSAOAC 分散 SPE 管。分散 SPE 管中含有 900 mg 無水硫酸鎂和150 mg C18。將離心管蓋緊，渦旋振蕩 1 min。然后用標(biāo)準(zhǔn)離心機(jī)以 4000 rpm 的轉(zhuǎn)速離心 5 min。取萃取液 2 mL 轉(zhuǎn)移至試管中，并在低于 40 °C 的溫度下于氮?dú)猸h(huán)境中干燥。最終殘留物用乙腈:水(1:9) 溶解并定容至 1 mL。然后將殘留物通過 0.2 µm 安捷倫優(yōu)級針頭過濾器進(jìn)行過濾（部件號 5190-5106）并用 LC/MS/MS 分析。

 結(jié)果與討論本研究根據(jù)建議將同樣適用于其他食品方法的 AOAC 分散 SPE 試劑盒應(yīng)用于雞肉分析。由于 LC/MS/MS 具有強(qiáng)大的選擇性，空白基質(zhì)的 MRM 色譜圖中未顯示目標(biāo)分析物的干擾峰。圖 1 和圖 2 中所示為空白基質(zhì)（內(nèi)標(biāo)加標(biāo)）和分散 SPE 方法處理后的10 ng/g 雞肉提取物的 LC/MS/MS 色譜圖?；厥章屎椭噩F(xiàn)性在粉碎的樣品中加入農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品來評估回收率和重現(xiàn)性，農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品濃度水平為 10 和 50 ng/g。各濃度水平重復(fù)分析 6 次?；厥章屎椭噩F(xiàn)性（以 RSD 表示）數(shù)據(jù)見表 4。由數(shù)據(jù)可知，所得的12 種農(nóng)藥的回收率和精密度良好。

結(jié)論適用于其他食品方法的 Agilent Bond Elut QuEChERS AOAC 緩沖提取試劑盒和分散 SPE 試劑盒為雞肉中代表性農(nóng)藥的純化提供了簡單、快速和高效的方法。根據(jù)加標(biāo)基質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)樣品來看，雞肉中多種類、多殘留農(nóng)藥測定的回收率和重現(xiàn)性是可以接受的。同時，雞肉中的雜質(zhì)和基質(zhì)效應(yīng)對目標(biāo)化合物的定量無干擾。由于研究中所選擇的農(nóng)藥代表了各種不同類別和性質(zhì)的農(nóng)藥，因此，Bond Elut QuEChERS AOAC 萃取和分散 SPE 試劑盒是用于類似食品基質(zhì)中其他農(nóng)藥分析的選擇。