實驗部分樣品制備向大鼠全血中加入不同濃度的氯氮ping、去甲氯氮ping和 N-氧化氯氮ping (0.5 - 10000 ng/mL)作為氯氮ping及其代謝物的校正標準。然后將校正標準 (20 µL) 點到寶萊 DBS 2B 型卡片上，各重復 3 次，干燥過夜待分析。以點有大鼠全血的 DBS 卡片作為空白樣品。以氘代氯氮ping(D4) 作為氯氮ping及其代謝物定量的內標。系統配置AACE LC/MS 系統（圖 2）包括：可進行 DBS 卡片自動化分析的 AACE 儀器10；兩臺 Agilent 1260 Infinity 二元液相色譜泵（一臺用于在線樣品提取和凈化，另一臺用于分析型液相色譜分離）；用于樣品稀釋的 Agilent 1260 Infinity 等度液相色譜泵；用于分析物檢測的 Agilent 6460 三重四級桿液質聯用LC/MS 系統。系統中所有組件和 DBS 卡片提取、樣品捕集、洗脫和 LC/MS 分析的整個過程均由單一軟件程序進行控制（圖 3）。

質譜儀設置質譜分析使用以正離子化模式運行的配置安捷倫噴射流離子源的 6460 三重四級桿LC/MS 系統進行。離子源條件和多反應監測 (MRM) 方法參數已針對氯氮ping及其代謝物進行了優化（表 3）。DBS 方法時間段設置時間段 1 從 DBS 中提取樣品至捕集柱 1 90 s時間段 2 捕集柱 1 樣品沖洗 70 s時間段 3 將樣品從捕集柱 1 轉移至捕集柱 2 30 s時間段 4 運行分析及捕集柱 1 沖洗和平衡 240 s

DBS 分析方法包括一個樣品加載的初始準備階段，和具有不同閥位置及泵程序的四個優化時間段（時間段 1 - 時間段 4），以便進行在線樣品提取、捕集和凈化，以及LC/MS 分析。如圖 4 所示，時間段 1 中將啟動提取泵程序和稀釋泵程序，而時間段 4 中將啟動分析泵程序和 6460 三重四級桿 LC/MS 系統。在分析型 LC 梯度仍在運行時即可再啟動下一次 DBS 提取的提取泵程序。因此，提取步驟與分析運行在時間上是相互重疊的，使分析周期（連續兩次 DBS 提取之間的持續時間）能夠縮短至 10 分鐘以內。

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結論我們已經證實使用自動化在線卡片提取系統，可利用 LC/MS 直接對 DBS 卡片上大鼠全血中的氯氮ping及其兩種代謝物進行分析。該系統可提供靈敏度，其LOQ 為 0.5 ng/mL，并可在超過 4 個數量級的動態范圍內提供優異的線性（平均 R2> 0.999）。定量分析的準確度 (85 –109%)、重現性 (%RSD < 6.2%) 和精確度 (%RSD< 8.9%) 良好，且均符合生物分析可接受標準。此外，自動化在線卡片提取系統與離線提取打孔方法相比，定量性能相差無幾。