實驗部分標樣和試劑用十二烷分別制備十種濃度不同的衍生雌二醇校準標樣，濃度從1.0 到 600 pg/mL（表 1）。每個樣品中，氘代雌二醇 (D3) 內標物 (ISTD) 濃度為 100 pg/mL。從血漿萃取出雌二醇時，使用 2 µL進樣量，在回收率為 100% 時，從 1.0 mL 基質進行萃取在理論濃度下將得到大約 20 fg 的分析物。因此，十二烷中 1.0 pg/ml 的標樣將代表回收率為 10% 的情況（進樣 2 fg），而 2.5 pg/mL 則代表回收率為 25%，以此類推。在 82 次連續進樣序列中對校準標樣進行評價。建立進樣序列，首先將 EA 1-10 系列重復運行六次，再將 EA 1-3 系列重復運行四次。在每一系列之后運行空白進樣。

儀器使用 Agilent 7890GC/7000 三重串聯四極桿氣質聯用系統進行分析。7890 系列 GC 配置多模式進樣口 (MMI)，并配用 15 m ×0.25 mm × 0.25 µm 膜厚的 DB-5MSUI 分析柱。7000 三重串聯四極桿 GC/MS 在 MS/MS-NCI（負化學電離）模式下進行操作。儀器條件列于表 2。使用 Agilent 7693 自動液體進樣器 (ALS)，用 10 µL 注射器進樣

結果與討論靈敏度與定量在三重串聯四極桿 GC/MS 系統上開發的該方法具有優異的靈敏度。本方法的檢測限定義為低檢出濃度，即信噪比為 10 時檢出濃度：1pg/mL（進樣 2 fg），如圖 1 所示。圖 2 給出了對 1 pg/mL 到 600 pg/mL 的雌二醇定量所得到的出眾的線性，R2 值趨近于 1。峰面積比的精度峰面積比（分析物峰面積除以內標物峰面積）的精度由標樣 EA-1到 EA-5 確定，每次校準至少包括五次重復測定（圖 3）。相對標準偏差（RSD）均未超過 15%，表明該方法的重現性良好。表 3分別給出了 10 次重復測定得到的高精度水平的響應比值，使用的是 EA-1 標樣，柱上 2 fg。

結論Agilent 7000 三重串聯四極桿 GC/MS 能夠使雌二醇的檢測限降至 1 pg/ml（柱上 2 fg），同時在 1 到 600 pg/mL 范圍內實現高重現性的定量。因此該方法非常適于雌二醇的常規分析。