肽譜分析是表征生物治療蛋白質*的工具，該方法廣泛運用于生物藥物 蛋白質的生產過程，以確保產品在各生產階段的完整性和穩定性。利用安捷倫LC/MS 進行肽譜分析是表征肽段修飾的技術。穩定且重現性高的 LC/MS 方法， 是成功實現肽譜分析分離的關鍵。因此，需要對 LC/MS 分離參數進行全面的 研究。

分析復雜蛋白質酶解物的過程中，如何實現肽段的、高分離度分離是一項 巨大的挑戰。甲酸是一種兼容質譜的離子對試劑，常用于 LC/MS 方法中，可實 現靈敏檢測。然而，甲酸也會導致峰形展寬，從而使肽段發生共洗脫1 。除此之 外，流動相含甲酸的現有 LC/MS 方法具有峰容量小、峰展寬以及對相似肽段分 離度差的限制。選擇正確的反相色譜柱和 LC/MS 方法，對肽譜分離的成功十分 重要。

Agilent AdvanceBio Peptide Plus 色譜柱專為的肽段分離而設計。HPH Poroshell 填料包覆了一層帶正電荷的改性表面基團。采用 C18 配基的表面多孔 顆粒填料表面帶電，可改善峰形并提高峰容量。孔徑 (120 Å) 和粒徑 (2.7 µm) 能夠以低色譜柱反壓提供類似 UHPLC 的性能。AdvanceBio Peptide Plus 色譜 柱還可以與含甲酸的流動相兼容，在與質譜聯用時可提供出色的峰形。

本應用簡報展示了 AdvanceBio Peptide Plus 色譜柱在用含甲酸的流動相對單克 隆抗體 (mAb) 進行肽譜分離時顯示出的性能。本文通過研究流速、梯度時 間和溫度等不同的填料影響因素，開發出了實現肽段分離的 LC/MS 方法。 并對峰容量、峰寬、峰面積、峰高、重現性和序列覆蓋率等肽譜分析的關鍵要 素進行了評價。