實例應用-如何計算DNA片段中的分子數

實驗室數學在生物學實驗數據分析中一直是一個令人頭疼的問題？在定量PCR實驗中，常常會遇到計算 DNA 片段中的分子、計算溶液的濃度或計算連續稀釋等，這樣的計算有沒有什么好的方法呢？

當然有了，在本文中，我們將教你簡單的 DNA 樣本中的分子計數法。

——例如，套入公式即可一招輕松拆解：500 ng 樣本中有多少個 50 堿基對 (bp) 片段的模板 /副本？這樣的棘手問題。使您很快就會成為實驗室中的計算高手！

一、計算 DNA片段中分子數量的應用

在進行以下類型的實驗時，通常需要DNA分子的計算：

DNA 連接。

生化分析。

實時 PCR（絕對定量）。

測量載體基因組的數量。

二、分子數計算公式的原理

我們知道，單個 DNA bp 的平均重量為 650 道爾頓。這也可以寫為 650 g/mol（= 摩爾質量）。因此，任何雙鏈 DNA 片段的分子量或摩爾質量都可以通過將其長度（以 bp 為單位）乘以 650來計算，答案將表示為道爾頓或 g/mol。

只要我們知道序列長度（即基因組的長度/大小），此計算將適用于任何物種的基因組 DNA。

三、實例與應用：

1.實例問題： 5.2-kb 質粒的分子量是多少？記住 5.2 kb = 5200 bp

計算： 5200 bp x 650 道爾頓 = 3,380,000 道爾頓或 g/mol

現在我們知道如何計算 DNA 模板的分子量了。使用阿伏伽德羅數，即 6.022 x 10 ²³分子/摩爾，可以使用以下公式計算每份模板的分子數：

2.實例問題：您有 300 ng 的 5.2-kb 質粒。你的質粒有多少 拷貝？

3.實例問題：您有 50 ng 的 20-bp 引物。你的引物有多少份？

4.實例問題：您有 150 ng 的 670 bp 純化 PCR 產物，你有多少份 PCR 產物？

注意：此公式基于您使用的是單一 DNA 物種的假設，因此在應用于 PCR 產物或質粒時，請確保您只有 1 個條帶或您有干凈的質粒小量制備。

所以實驗中，只要知道 DNA 片段的長度和以納克為單位的濃度，您就可以輕松應用該公式來獲得任何類型的 DNA 樣本中的拷貝數。

四、其他分子量計算常用的公式

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