抗原修復技術概述

抗原修復技術主要用于增強免疫組織化學檢測中的信號。下面介紹一下抗原修復方法和修復技巧。
一、抗原修復方法
固定是在免疫組織化學過程中進行的一個關鍵步驟，以保持組織形態。然而，這種方法也可能對免疫組織化學產生不利影響，因為它經常改變蛋白質生物化學并掩蓋感興趣蛋白質的表位。因此，一抗無法與蛋白質結合，導致信號強度低。這種掩蔽效應可能是由表位中氨基酸的交聯或無關但存在于表位附近的肽的交聯引起的。這會改變抗原的構象或靜電荷。在抗原修復過程中，這種掩蔽被逆轉，從而可能發生抗原與表位之間的結合。
二、抗原修復技巧
抗原修復基于幾個變量，例如目標抗原、抗體、組織類型以及固定的持續時間和方法。通常，多克隆抗體在不使用抗原修復方法的情況下可能會更好地工作，因為它們識別多個表位。然而，單克隆抗體依賴于對單個特定表位的識別才能發揮作用。正在使用多種策略來檢索抗原。有些方法就像改變抗體稀釋劑中陽離子的pH值或濃度一樣簡單，這也可以改變抗體及其表位的親和力。


在表位被部分掩蓋的情況下，可以在嘗試其他抗原修復方法之前增加一抗孵育。然而，必須首先優化孵育時間、溫度和濃度的這些參數。目前使用兩種主要方法來檢索抗原。
1.蛋白酶誘導表位修復 (PIER)
在這種方法中，不同的酶用于恢復抗原和表位之間的結合。這個過程應該通過切割形成表位的肽來工作。然而，PIER成功率低，在此過程中可能會破壞組織形態和抗原。
2.熱誘導表位修復 (HIER)
        在該技術中，熱量用于逆轉交聯并恢復原始和三級表位結構。該方法針對每種組織、固定方法和感興趣的抗原進行了優化。
在這種情況下，使用微波爐、壓力鍋、蒸鍋、高壓釜或水浴提供熱量。這種方法比PIER方法有更高的成功率。在此過程中，樣品在更換緩沖液之前會短時間加熱。
某些實驗室使用溫度設置為 60°C 的水浴，然后將載玻片在修復溶液中孵育過夜。
      如果切片在高溫下從載玻片上脫落（可能用于骨骼、軟骨和皮膚），此類技術可能很有用。在這種方法中，載玻片在加熱之前先冷卻。HIER 受時間、溫度、緩沖液和 pH 值的影響，該方案是通過反復試驗確定的。
三、抗原修復的局限性是什么？
抗原修復過程通常需要將樣品牢固地粘附在載玻片上。此外，這種方法對于某些樣品通常過于苛刻，例如低溫恒溫器組織和酒精固定組織。還需要優化每個樣品的溫度、時間和 pH 值；在決定每個樣品的最佳條件之前，需要測試這些條件。

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