皖儀離子色譜法測(cè)定多肽中的哌啶

關(guān)鍵詞：離子色譜；多肽；合成；哌啶；方法學(xué)。

引言

哌啶是一種含有兩個(gè)碳和一個(gè)氮的環(huán)狀有機(jī)化合物。在多肽合成中，哌啶主要是作為一個(gè)結(jié)構(gòu)單元或一個(gè)反應(yīng)的底物存在。哌啶在多肽合成中起到了多種作用，從結(jié)構(gòu)單元到保護(hù)基團(tuán)，再到反應(yīng)底物和優(yōu)化反應(yīng)條件。哌啶在最終合成的多肽中有所殘留，而哌啶具有毒性，是一種升壓劑，因此必須控制最終產(chǎn)物的哌啶殘留量。皖儀開(kāi)發(fā)了一種離子色譜測(cè)試方法檢測(cè)多肽中哌啶的含量，樣品前處理操作簡(jiǎn)單，測(cè)試準(zhǔn)確性高，重復(fù)性良好，與其他組分間分離度良好，可以滿足客戶大規(guī)模測(cè)試的要求，并且提高時(shí)效性，測(cè)試結(jié)果一致性，減少人為及系統(tǒng)誤差。

1、實(shí)驗(yàn)方法

1.1 測(cè)試條件儀器：

IC6600系列離子色譜儀配置電導(dǎo)檢測(cè)器

圖為IC6600系列多功能離子色譜儀

色譜柱：MS-5C-P1陽(yáng)離子色譜柱（4.6mm×250mm）；
保護(hù)柱：陽(yáng)離子保護(hù)柱（30 mm×4 mm）；

柱溫：30℃；

流速：1.0ml/min；

進(jìn)樣量：25μL；

檢測(cè)器：電導(dǎo)檢測(cè)器。

1.2 使用試劑標(biāo)樣：哌啶標(biāo)準(zhǔn)樣品（客戶提供的純哌啶）

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備標(biāo)準(zhǔn)原液的制備：稱(chēng)量0.100g純哌啶移至100mL容量瓶用純水定容至刻度線。

標(biāo)準(zhǔn)樣品工作液:分別吸取0.002mL、0.005mL、0.01mL、0.02mL、0.05mL、0.08mL和0.10mL母液(1000mg/L)于10mL容量瓶中,用超純水定容至刻度,配得哌啶質(zhì)量濃度為0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、8mg/L和10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。臨用現(xiàn)配。

表1標(biāo)準(zhǔn)系列曲線濃度梯度表

2、測(cè)試結(jié)果

2.1 哌啶線性測(cè)試結(jié)果

依次移取0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、8mg/L和10mg/L的系列標(biāo)準(zhǔn)工作曲線工作液，按照1.1工作測(cè)試條件得到標(biāo)準(zhǔn)曲線多點(diǎn)重疊圖如圖1，哌啶在該色譜條件下線性相關(guān)系數(shù)R=0.999以上，線性良好。

圖1 哌啶標(biāo)準(zhǔn)曲線重疊色譜圖

表2線性方程

2.2 樣品譜圖

在1.1的工作測(cè)試條件下條件下，對(duì)樣品進(jìn)行檢測(cè)。樣品圖譜如圖2所示樣品圖譜中的目標(biāo)哌啶離子峰形對(duì)稱(chēng)，分離度良好，最終得到樣品中哌啶的含量。樣品中哌啶含量為2.283mg/L，樣品重復(fù)性良好樣品RSD在0.301％，符合客戶需求。

圖2 樣品測(cè)試譜圖

3、總結(jié)

本次采用皖儀科技離子色譜儀IC6600系列對(duì)樣品中的哌啶進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線驗(yàn)證、重復(fù)性驗(yàn)證。測(cè)試結(jié)果峰形較好，線性良好，重復(fù)性滿足要求，靈敏度高完全滿足測(cè)試要求。