產(chǎn)品特點：

• 在寬的RNA起始量范圍內(nèi)，RT-qPCR結(jié)果的一致性更高，cDNA合成效率更高
• 方便的預混液形式，可降低移液差異
• 包含用于RT-qPCR的dsDNase和no-RT對照，可控制RNA制備中的gDNA污染風險

技術細節(jié)：

• 在96-基因檢測板陣列中，cDNA合成效率始終較高
• 在較寬的動態(tài)范圍（1 pg-1 μg的總RNA）內(nèi)，cDNA合成呈更高線性度
• 在42°C-55°C的反轉(zhuǎn)錄過程中保持完整的酶活性

在較寬的動態(tài)范圍內(nèi)具有高轉(zhuǎn)錄效率

Maxima H Minus cDNA合成預混液可在較寬的模板濃度范圍內(nèi)保持高轉(zhuǎn)錄效率和良好的線性（圖1）。良好的線性表明，無論使用大量還是少量起始RNA，都能可靠代表不同轉(zhuǎn)錄物的相對數(shù)量。

圖1. Maxima H Minus cDNA合成預混液的廣泛動態(tài)范圍。標準曲線在寬的起始RNA范圍內(nèi)具有高度線性度（R2 = 0.999），這表明無論總RNA豐度是多少，特定RNA轉(zhuǎn)錄物的相對代表性在cDNA庫中得以保留。將HeLa細胞總RNA進行10倍連續(xù)稀釋（1 μg至0.1 pg），然后對人18S RNA基因進行擴增。使用Maxima H Minus cDNA合成預混液生成鏈cDNA。使用Thermo Scientific Luminaris Probe qPCR預混液（低ROX），在Applied Biosystems ViiA 7實時PCR系統(tǒng)上擴增cDNA。
 

一致的轉(zhuǎn)錄效率

在使用少量和大量起始RNA時，Maxima H Minus cDNA合成預混液都比其他品牌的反轉(zhuǎn)錄酶具有更高的效率（圖2）。轉(zhuǎn)錄效率越高，RNA使用量越少，并且能夠準確檢測低表達的轉(zhuǎn)錄物。

圖2. Maxima H Minus cDNA合成預混液的轉(zhuǎn)錄效率更強。在廣泛的RNA起始量范圍內(nèi)，Maxima H Minus cDNA合成預混液比其他品牌的反轉(zhuǎn)錄酶具有更高的效率。將HeLa細胞總RNA進行10倍連續(xù)稀釋（1 μg to 0.1 pg），然后對人18S RNA基因進行擴增。使用Maxima H Minus cDNA合成預混液、用于RT-qPCR 的Thermo Scientific Maxima鏈cDNA合成試劑盒以及來自其他四家供應商的反轉(zhuǎn)錄酶，生成鏈cDNA。使用Luminaris Probe qPCR預混液（低ROX），在ViiA 7實時PCR系統(tǒng)上擴增cDNA。擴增曲線表示ΔRn隨循環(huán)數(shù)的變化。
 

對靶標陣列實現(xiàn)一致、可靠的轉(zhuǎn)錄

使用Maxima鏈cDNA合成試劑盒得到的RT-qPCR數(shù)據(jù)進行歸一化處理后發(fā)現(xiàn)，在RT-qPCR中96個靶基因中，Maxima H Minus cDNA合成預混液始終比其他供應商的反轉(zhuǎn)錄酶預混液具有更高的效率（圖3）。

圖3. C_t值一致降低。在廣泛的靶標范圍內(nèi)，Maxima H Minus cDNA合成預混液比其他市售預混液具有更高的cDNA合成效率。使用96基因Applied Biosystems TaqMan®檢測板和100 ng HeLa總RNA起始量，將Maxima H Minus cDNA合成預混液與Thermo Scientific Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR以及其他品牌的預混液進行比較。以Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR作為對照，得到檢測板中96個基因的ΔCt值（ΔC_t = Maxima H Minus cDNA 合成預混液或其他市售產(chǎn)品的C_t – 用于RT-qPCR 的Maxima First Strａnd cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR的C_t）。

完整的cDNA合成工作流程解決方案

Maxima H Minus cDNA合成預混液具有雙鏈特異性DNA酶（dsDNase），與傳統(tǒng)DNase I相比，可更快、更高效和更地去除gDNA。dsDNase處理的RNA樣品未顯示出RNA完整性和數(shù)量的降低。在cDNA合成之前使用dsDNase處理，可限度降低使用傳統(tǒng)DNase I凈化樣品帶來的損失風險。

Maxima No-RT 對照混合物將與Maxima H Minus反轉(zhuǎn)錄酶預混液一起提供，從而為2步法RT-qPCR提供完整的cDNA合成解決方案。這種No-RT 對照混合物包含反轉(zhuǎn)錄預混液中除Maxima H Minus反轉(zhuǎn)錄酶以外的所有成分，使研究人員能夠準確確定無殘留的gDNA污染。

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