蘭博液相色譜在牡丹皮中丹皮酚的含量應用

牡丹皮為毛茛科植物牡丹的干燥根皮，味苦、性微寒，具有清熱涼血，活血散瘀的功能。丹皮酚是丹皮中重要的有效成分，具有鎮靜、催眠、抗菌、抗炎、抗氧化、降血壓等多種功效。目前采用液相色譜測定丹皮酚的含量是丹皮及其制劑質量的控制指標。本文采用天津蘭博的液相色譜系統，建立了檢測丹皮中丹皮酚的含量的方法，結果顯示方法簡便，結果可靠。

1 測試條件

1.1 儀器

分析型液相色譜儀（HPLC），由AS1000自動進樣器，Lablliance Series 高壓泵、DAD檢測器和Lablliance色譜工作站組成，配一支C18 Kromasil 色譜柱( 4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱溫箱。

GC6500美國蘭博液相色譜儀

1.2試劑和樣品

丹皮酚標準品（中國藥品生物制品檢定所），甲醇（色譜純），水為屈臣氏蒸餾水，其他試劑為分析純，丹皮樣品購自當地藥店，來源安徽銅陵。

1.3標準溶液配制

精密稱取丹皮酚標準品4 mg于100 mL容量瓶中，用甲醇醇溶解并定容至刻度，搖勻備用，配成40 ug/mL濃度的標準儲備液。測定前用流動相稀釋成所用濃度。

1.4供試品溶液的制備

取本品粗粉約0. 5 g，精密稱定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加入甲醇 25 mL，稱定重量，超聲提取30 min, 放冷, 加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液2 mL，置25 mL量瓶中, 加甲醇稀釋到刻度, 搖勻。

1.5色譜條件：

色譜柱：Kromasil (4. 6 mm × 250 mm, 5 um)；

流動相：50%甲醇-水溶液（v/v）

柱溫：室溫；

流速：1.0 mL/min；

檢測波長：274 nm；

2測試結果：

2.1 色譜系統適應性測試

按1.5的測試條件對丹皮酚標準品進行檢測，所得色譜圖如圖1 所示，以丹皮酚計算理論塔板數不小于3000。

圖1 丹皮酚標準品的液相色譜圖

2.2線性關系、方法檢出限考察

精密吸取丹皮酚標準品溶液2. 0、4. 0、6. 0、8. 0、10 mL置10 mL 量瓶中，流動相稀釋至刻度，各進樣 20 uL，測定峰面積積分值。以對照品溶液濃度(mg/L)對峰面積進行回歸，結果表明丹皮酚峰面積積分值與濃度C呈良好的線性關系，回歸方程為： Y = 82. 64 + 41362. 8C，R= 0. 9998，線性范圍為 0. 36～2.2 ug。

2.3丹皮酚穩定性實驗

取丹皮酚標準品溶液, 于配制后的 0、2、4、8、12、20、24和 48 h測定, 結果表明在 48 h內穩定, 峰面積的相對標準偏差 (RSD )為 0.98% 。

2.4丹皮酚精密度和重現性實驗

取丹皮供試品溶液10 uL重復進樣8次，根據所得面積值計算， RSD =0. 60%。取丹皮藥材6份，平行進行提取測定，求得丹皮酚含量的 RSD 為1. 82%。

2.5丹皮酚回收率實驗

精密稱取 8份丹皮藥材樣品0. 5 g，分別加入相當于含丹皮酚0. 75 mg、0. 25 mg的對照品溶液各4份，按1.4方法提取后進樣分析，測得丹皮酚的回收率分別為 97. 96，98. 21，RSD 為1. 84、1. 56。進行加樣法測定回收率, 平均回收率99. 21% , RSD= 1.60%。

3結論

采用液相色譜對丹皮酚進行測定，結果顯示本方法方便、準確、精密度高，重現性好，可以用來對于藥材適量進行監測。