梯度洗脫的原理

具體地講，當樣品隨梯度起點的流動相進入色譜柱入口時，由于起點流動相中弱洗脫溶劑A含量較高，強洗脫溶劑B含量較低，化合物C1(保留性適中)和化合物C2(保留較強)因分配系數(shù)(k值)較高而滯留于色譜柱入口附近，幾乎未移動。一段時間后，B增加到一定數(shù)值，C1的k值達到足夠小(比如小于10)，其在柱中的移動速率明顯增大，并且隨著B的增加，其移動速率愈加快速，直到tC1時流出色譜柱，被檢測器檢測到并被記錄成色譜峰C1，tC1雖然比等度時的保留時間長很多，但C1的的平均k值卻很小，因而色譜峰并未展寬，靈敏度仍處于較高水平。B持續(xù)增加，在隨后的某個時間點，C2的k值也降到10以下，C2的移動速率也開始變快，以與C1類似的方式于tC2被洗脫出色譜柱，其平均k值同樣很小，色譜峰亦未展寬，靈敏度處于較高水平。

流動相的梯度變化即流動相極性、PH值等的梯度變化，即洗脫能力成梯度變化。

洗脫要求

1.洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使各峰*或基本分離；

2.梯度的上限（強洗脫溶劑的比例）要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。

3.梯度不要上升太快，要恰好使移動的區(qū)帶在快到柱末端時達到解吸狀態(tài)。目的物的過早解吸，會引起區(qū)帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。