色譜柱在使用前，進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。在做柱性能測試時要按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是*條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同。

1、樣品的前處理

a、使用流動相溶解樣品。

b、使用預處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產生不可逆吸附的雜質。

c、使用0.45µm的過濾膜過濾除去微粒雜質。

2、流動相的配制

液相色譜是樣品組分在柱填料與流動相之間質量交換而達到分離的目的，

因此要求流動相具備以下的特點：

a、流動相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會沉淀在柱中

(或長時間保留在柱中)。

b、流動相與樣品不產生化學反應

c、流動相的黏度要盡量小，以便得到好的分離效果；降低柱壓降，延長泵的使用壽命(可運用提高溫度的方法降低流動相的黏度)。

d、流動相的物化性質要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。

 e、流動相沸點不要太低，否則容易產生氣泡，導致實驗無法進行。

f、在流動相配制好后，一定要進行脫氣。除去溶解在流動相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動相中的微量氧與樣品發生作用。

3、流動相流速的選擇

因柱效是柱中流動相線性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱要追求*柱效，使用*流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。

當選用*流速時，分析時間可能延長。可采用改變流動相 的洗滌強度的方法以縮短分析時間(如使用反相柱時，可適當增加甲醇或乙腈的含量)。

注意：  

a．含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要隔夜。加入*，防止細菌生長。  

b．流動相要求使用0.45µm濾膜過濾，除去微粒雜質。  

c．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。

色譜柱的維護 

注意：  

a．含水流動相在實驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動相不要隔夜。加入*，防止細菌生長。  

b．流動相要求使用0.45µm濾膜過濾，除去微粒雜質。  

c．使用HPLC級溶劑配制流動相，使用合適的流動相可延長色譜柱的使用壽命，提高柱性能。  

1.色譜柱的維護 

甲醇或乙腈沖洗色譜柱。請一定確保您分析樣品所使用的流動相和乙腈/水互溶。每天用足夠的時間以流動相來平衡色譜柱，您就會在處理問題方面獲得zui大的"補償"，而且您的色譜柱的壽命也會變得更長！操作步驟：  

a.平衡開始時將流速緩慢地提高，用流動相平衡色譜柱直到獲得穩定的基線（緩沖鹽或離子對試劑流速如果較低，則需要較長的時間來平衡） 

b.如果使用的流動相中含有緩沖鹽，應注意用純水"過渡"即每天分析開始前必須先用純水沖洗30分鐘以上再用緩沖鹽流動相平衡；分析結束后必須先用純水沖洗30分鐘以上除去緩沖鹽之后再用甲醇沖洗30分鐘保護柱子。 

2．色譜柱的再生  

長期使用的色譜柱，往往柱效會下降（柱子的理論塔板數減低）。可以對色譜柱進行再生，在有條件的實驗室應使用一個廉價的泵進行柱子的再生。 

建議用來沖洗柱子的溶劑體積    色譜柱尺寸柱體積所用溶劑的體積    125-4mm1.6ml30ml    250-4mm3.2ml60ml    250-10mm20ml400ml  

選擇再生方法：  

  極性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色譜填料）的再生：    正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**  

  非極性固定相（如反相色譜填料RP－18，RP－8，CN等）的再生：水→乙腈→氯仿（或異丙醇）→乙腈→水  

注意：  

a.在對NH2改性的色譜柱進行再生時，由于NH2可能以銨根離子的形式存在，因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后再用水沖洗至堿溶液*流出。  

b.0.05M稀硫酸可以用來清洗已污染的色譜柱，如果簡單的用有機溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質，在水洗后加用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 

3.色譜柱的維護 

a．使用預柱保護分析柱（硅膠在極性流動相/離子性流動相中有一定的溶解度）  

b．大多數反相色譜柱的pH穩定范圍是2－7.5，盡量不超過該色譜柱的pH范圍  

c．避免流動相組成及極性的劇烈變化  

d．流動相使用前必須經脫氣和過濾處理 

e．如果使用極性或離子性的緩沖溶液作流動相，應在實驗完畢柱子沖洗干凈，并保存于甲醇或乙腈中  

f．氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時要注意，柱及連接管內不能長時間存留此類溶劑，以避免腐蝕

1 、色譜柱的使用說明：

( 1 )、 色譜柱使用前注意事項：色譜柱的儲存液無特殊說明，均為評價報告所示的流動相。在使用前，一定要注意色譜柱的儲存液與要分析樣品的流動相是否互溶。在反相色譜中，如用高濃度的鹽或緩沖液作洗脫劑，應先用 10 ％左右的低濃度的有機相洗脫劑過渡一下，否則緩沖液中的鹽在高濃度的有機相中很容易析出，堵塞色譜柱。

( 2 )、 流動相：流動相中所使用的各種有機溶劑要盡可能使用色譜純，配流動相的水是超純水或全玻璃器皿的雙蒸水。如果將所配得流動相再經過 0.45μm 的濾膜過濾一次則更好，尤其是含鹽的流動相。另外，裝流動相的容器和色譜系統中的在線過濾器等裝置應該定期清洗或更換。
 以常規硅膠為基質的鍵合相填料通常的 PH 值適用范圍是 2.0-8.0 ， BDS C18 適合于堿性化合物， PH 值適用范圍為 2.0-10.0 。當必須要在 PH 值適用范圍的邊界條件下使用色譜柱時，每次使用結束后立即用適合于色譜柱儲存并與所使用的流動相互溶的溶劑清洗，并*置換掉原來所使用的流動相。
( 3 )、 樣品：樣品也要盡可能清潔，可選用樣品過濾器或樣品預處理柱( SPE )對樣品進行預處理；若樣品不便處理，要使用保護柱。在用正相色譜法分析樣品時，所有的溶劑和樣品應嚴格脫水。

2 、色譜柱的保存

( 1 )、 反相色譜柱每天實驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用 10% 的甲醇 / 水沖洗 30 分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗 30 分鐘。 注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入 10% 的甲醇，防止將填料沖塌陷。

 ( 2 )、 長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水(含防腐劑*或柳硫汞)中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度是室溫。

3 、色譜柱的再生因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數的增加，會出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰的現象，一般來說可能是柱效下降。
( 1 )、 反相柱的再生 ： 依次采用 20-30 倍的色譜柱體積的甲醇：水 =10 ： 90 ( V/V )，乙腈，異丙醇作為流動相沖洗色譜柱，完成后再以相反順序沖洗色譜柱。
( 2 )、 正相柱的再生 ： 依次以 20-30 倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱，然后再以相反的順序沖洗色譜柱。要注意上述溶劑必須嚴格脫水。

4 、色譜柱在使用過程中易出現的問題和解決辦法色譜柱在使用中zui常見的問題就是柱壓升高，如果柱壓是在長時間使用過程中緩慢增加，屬于正常現象。但柱壓在使用過程中突然升高(系統管路堵塞及壓力傳感器故障除外)，可能的原因有如下幾點：

( 1 )、色譜柱頭的過濾篩板堵塞或污染；

( 2 )、色譜柱頭的填料被樣品污染；

( 3 )、色譜柱內緩沖液中的鹽遇到高濃度的甲醇或其他有機溶劑，形成結晶析出；

( 4 )、流動相 PH 值過大或過小使固定相結構破壞或溶解。

解決辦法如下：

( 1 )、如確定是色譜柱頭的過濾篩板被污染，可以將色譜柱反方向用甲醇沖洗至正常壓力，或者卸下色譜柱頭，將其放在 10 ％的稀硝酸內超聲清洗 10 分鐘，后再用純水超聲 10 分鐘，重新裝入色譜柱。

( 2 )、如確定色譜柱頭的填料被污染，將柱頭螺絲卸下，挖出柱內前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔細修復后，重新安裝上柱頭螺絲。
( 3 )、如確定定是鹽結晶，用 10% 的甲醇 / 水沖洗色譜柱使柱內鹽全部溶解，再換高濃度甲醇。
( 4 )、如果因 PH 值使用不當，很難恢復。