多重 PCR 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)

試劑、試劑盒          

Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物

儀器、耗材    

熱循環(huán)儀

實(shí)驗(yàn)步驟      

一、材料

1. 酶和酶緩沖液

Taq 聚合酶

許多 Taq 聚合酶都可以用；作者發(fā)現(xiàn) Roche 公司的 Taq 聚合酶可以滿足大多數(shù)需要. 如果需要提高PCR 產(chǎn)物的特異性，應(yīng)該使用熱啟動聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附帶的緩沖液。

2. 核酸和寡核苷酸

（1）溶于水的 DNA

如果 DNA 在 TE 中，應(yīng)該在 PCR 反應(yīng)混合物中添加 MgCl2. 如果用從石蠟包埋的組織中純化的DNA 做模板，選擇的 STR 標(biāo)記的大小應(yīng)該是 78~250bp, 因?yàn)檫@些 DNA 模板的完整性不定。

參照 DNA 可以從外周血組織或者非惡性組織中純化獲得。對于白血病，則難以獲得腫瘤 DNA 的合適的參照 DNA。因此，使用從患病期間和之后的血液中提取的 DNA 作參照進(jìn)行分析。

腫瘤 DNA。很難避免非惡性細(xì)胞對腫瘤組織的污染。對腫瘤組織進(jìn)行顯微解剖是避免污染的一種途徑，但是該過程費(fèi)時，而且產(chǎn)量低（參見第 11 章）.

為了保證獲得 LOH 分析的信患，應(yīng)該分析大量的樣品。因此，純化過程必須是可靠的，可重復(fù)的，保證可以從大量的樣品中提取出高質(zhì)量的 DNA。—種評估腫瘤 DNA 質(zhì)董的方法就是利用一部分樣品，使用 STR 對已經(jīng)確定的特異類型的腫瘤染色體上的 LOH 進(jìn)行分析。

（2）引物

重要的一點(diǎn)就是細(xì)心地選擇熒光基團(tuán)以確保在所用的電泳儀器上能被檢測到。例如，綠色的 TET 就不能在 ABI3100 儀器上使用。

標(biāo)記的引物儲備液可以保存在-20°C, 稀釋之后的工作液可以在 4°C 保存. 放置黑盒中避光。

3. 專用設(shè)備

熱循環(huán)儀