人胰腺癌裸小鼠模型

人胰腺癌裸小鼠模型

實驗方法原理

          將人胰腺癌細胞株8988 接種于裸鼠腋窩處皮下，每周測量腫瘤大小，第42d 處死小鼠。腫瘤組織及相關臟器送病理及電鏡檢查，放射免疫法檢測相關抗原。皮下腫瘤組織細胞及細胞株培養，HE 染色。

實驗材料         

裸小鼠BALB c nu-nu胰腺癌細胞株8988

試劑、試劑盒

RPMI-1640 *培養基胰酶戊二醛

儀器、耗材    

CO2 培養箱試管

實驗步驟         

一、實驗材料準備

裸小鼠BALB/ c nu- nu ，4～6 周齡，體重16～20 g，雌雄兼備，SPF 級環境中飼養，恒溫25～27 ℃，恒濕45%～50% ，飲用水及食物均經滅菌。

二、人胰腺癌細胞株8988 體外傳代培養

1.  將人胰腺癌細胞株放入含10 %的RPMI-1640 *培養基中，置于37 ℃、5 %CO2 培養箱中，每2d 換液1次，2～3d，0. 25 %的胰酶消化，一傳3 傳代培養。

2.  待細胞布滿瓶底時,收集單細胞懸液，每只5 ×106 腫瘤細胞，0. 2ml ，注射于裸小鼠腋窩處皮下，建立腫瘤模型。

3.  每周用游標卡尺測量腫瘤大小，按公式V= π/ 6 ×長×寬×高，計算腫瘤大小，并繪制生長曲線。

三、血清學檢測

第6 周時拔眼球法處死小鼠，收集血液于試管中，靜置取血清，檢測腫瘤相關抗原及淀粉酶。

四、巨檢

1.  處死裸鼠后，皮下剝離腫瘤，記錄質地、浸潤、血供情況，觀察有無腹腔粘連，各臟器轉移狀況。

2.  將腫瘤組織、肺、肝、脾、腸系膜、十二指腸、胃、腦等取標本置于10 %的福爾馬林固定液中待用。

五、病理學檢測

上述標本常規石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡觀察。

六、超微結構觀察

腫瘤組織2. 5 %戊二醛，1 %鋨酸雙固定，包埋，超薄切片，鈾鉛雙重染色，透射電鏡觀察。

七、鏡檢

1.   腫瘤組織細胞培養及活細胞觀察：取新鮮裸鼠皮下腫瘤組織，PBS 漂洗3 次，剪成1 m3 大小，0. 25 %的胰酶消化，去除粗大組織后，制成單細胞懸液，置37 ℃、5%CO2 培養箱中培養，倒置顯微鏡下觀察其形態、生長情況等， 并與細胞株8988 進行比較。

2.  細胞HE 染色及形態學觀察：腫瘤細胞及細胞株相同量培養于含有蓋玻片的六孔板中， 生長至次融合后，棄培養基，PBS 洗3 次，2. 5 %戊二醛固定，PBS 洗3 次，HE 染色，光鏡下觀察比較。