生物藥用蛋白制劑生產研發過程中不溶性微粒異物檢測全流程解決方案

一、案例分析說明

首先我們來了解什么是生物藥用蛋白制劑：

生物藥用蛋白制劑是指用于預防、治療和診斷的蛋白質類物質生物藥物，比如胰島素、內啡肽等等，與小分子藥物相比，蛋白質藥物具有高活性、特異性強、低毒性、有利于臨床應用的特點，具有廣闊的應用前景。

生物蛋白制劑同樣需要檢測澄清度、不溶性微粒、可見異物（參考《中國藥典2020版》）。本文通過某生物醫藥公司藥用蛋白制劑的3個檢測指標，來進行顆粒物案例分析。

二、檢測方法和結果

待檢樣品：某生物醫藥公司藥用蛋白制劑

檢測方法：依據《中國藥典2020版》0902澄清度檢查；0903不溶性微粒檢查；0904可見異物檢查。

0902 澄清度檢查

檢查目的：比較不同批次樣品的澄清度

檢查方法：中國藥典0902第一法（目視法）

儀器設備：HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈

測試流程：

1，樣品準備：不同編號樣品（A、B、C、D）于冰箱中取出。

2，檢測過程：開啟HN-200A澄清度檢查傘棚燈電源，調節白色光源旋鈕，經過標準照度計測量，將燈光強度調節至1000 lx±10%范圍，將待測樣品置于目視窗口，人眼水平觀察。

測試結果：

圖1顯示的是不同編號蛋白制劑樣品在HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈下的實物照片，從中可以看到樣品A的澄清度最差，樣品D具有最佳的澄清度。

圖1.不同樣品在HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈下的實物照片

0903 不溶性微粒檢查

檢查目的：檢測藥用蛋白制劑中的不溶性微粒數量

檢查方法：中國藥典0903第二法（顯微計數法）

儀器設備：YH-MIP-0103顯微計數法不溶性微粒分析儀

測試流程：

1，樣品準備：取0.45μm微孔濾膜 (直徑13 mm)置于過濾裝置上，將0.4 mL待測樣品倒入過濾裝置，進行抽離過濾；過濾結束后，將濾膜轉移到培養皿中，于低溫下烘干。

2，檢測過程：樣品濾膜取出后放入到YH-MIP-0103顯微計數法不溶性微粒分析儀的測試臺上，調整測試參數，于100倍的放大倍率下進行聚焦掃描，測試結束后得到一張包含樣品不溶性微粒的大圖以及詳細的粒子粒徑和數量報告。

測試結果：

      由于測試樣品體積為0.4 mL，故其測試結果判定標準參照《中國藥典-0903不溶性微粒檢查》章節中小容量體積的標準。

表一：《中國藥典-0903不溶性微粒檢查》結果判定標準

在此章節中，藥典規定：光阻法不適用于黏度過高和易析出結晶的制劑，也不適用于進入傳感器時容易產生氣泡的注射劑。當光阻法測定結果不符合規定或者供試品不適于光阻法測定時，應采用顯微計數法進行測定，并以顯微計數法的測定結果作為判定依據。

測試數據:

表二：不同樣品的不同尺寸范圍微粒的數量及判定結果

       以上A、B、C、D樣品不溶性微粒的測試結果表明該系列樣品中的不溶性微粒檢測符合《中國藥典-0903不溶性微粒檢測》章節中的檢測標準。從不同樣品的不溶性微粒的測試結果來看，可以看到樣品A中尺寸≥25 μm的粒子數量最多，而D樣品中尺寸≥25 μm的粒子數量最少，這與澄清度檢查章節中的測試結果具有很好的關聯性。

圖2為樣品A的顯微計數法不溶性微粒掃描的全局圖以及部分圖，從圖2 (b)、(c)中可以清晰地觀察到樣品制劑里面的不溶性微粒的形狀，表明該測試結果可以作為輔助手段鑒別不溶性微粒的來源。

圖2.樣品A顯微計數法不溶性微粒檢測全局圖片(a)，部分圖片 (b) (c)。

0904 可見異物檢查

檢查目的：觀察樣品制劑中的可見異物

檢查方法：中國藥典0904第一法（燈檢法）

儀器設備：Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈

測試流程：

1、儀器準備：進行可見異物檢測時應避免引入可見異物，測試環境應為無菌無塵環境。檢測前應對容器外壁進行擦拭，必要時將藥液轉移至潔凈透明的適宜容器中進行觀察。

2、檢測過程：打開Lu -200A可見異物檢查專用傘棚燈，調節光源的光亮強度，配用照度計，將儀器的光強調節至1000 lx-1500 lx，將樣品置于遮光板邊緣處，手持容器頸部，輕輕反轉以避免產生氣泡，隨后進行觀察。

測試結果：

可見異物系指存在于注射劑、眼用液體制劑和無菌原料藥中，在規定條件下目視可以觀測到的不溶性物質，其尺寸大于50 μm。下表為《中國藥典》0904章節中對于注射液無菌制劑中不溶性微粒數量的判定要求。

表三：注射用無菌制劑結果判定

圖3為不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實物圖，可以清晰地觀察到樣品溶液中存在可見異物，并且其中的可見異物數量超過藥典中的規定標準，其中樣品A中的可見異物最多，這與該系列樣品的不溶性微粒測試結果相一致。

圖3. 不同樣品在Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈下的實物圖

三、 檢測總結果

經過對上述生物蛋白制劑微粒異物檢測分析可以得出以下結論：該生物蛋白質劑經過澄清度檢查、不溶性微粒檢查以及可見異物檢查之后，雖然該生物制劑的不溶性微粒檢查結果已經達到了《中國藥典》中相關章節的檢測標準，但是其可見異物檢查觀察到的粒子數量已超過《中國藥典》中的標準規范。

以上的測試結果表明HN-200A澄清度檢查專用傘棚燈、YH-MIP-0103顯微計數法不溶性微粒分析儀、Lu-200A可見異物檢查專用傘棚燈均可對生物藥用蛋白制劑中的微粒異物進行有效的檢測，并且三項測試得到的測試結果具有很好的一致性，表明以上儀器均符合《中國藥典》中相關檢查的儀器要求。

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