基因毒性雜質（或遺傳毒性雜質）是指化合物本身能夠直接或間接損傷細胞DNA，產生基因突變或體內誘變，具有致癌可能或者傾向的一類物質。近年來，已經上市的藥品中由于存在痕量的基因毒性雜質而引發大規模醫療事故，繼而藥品被召回的事件時有發生。FDA、EMA、ICH先后發布了對基因毒性雜質的指導原則，推薦使用毒理學關注閾值TTC（1.5 μg/day）作為基因毒性雜質的可接受限度。我國2020版《中國藥典》新增了《遺傳毒性雜質控制指導原則》，藥企在研發過程中越來越關注基因毒性雜質的控制和檢測。磺酸酯類化合物作為一類典型的基因毒性雜質，可以直接或間接地代謝活化后的烷基化DNA。

現有的磺酸酯類化合物氣相和氣質檢測方法通常需要進行衍生，操作繁瑣。運用GC進行檢測，方法定性能力差且靈敏度低，GC-MS方法雖然可以提高檢測靈敏度，但對于一些基質復雜的藥物抗干擾能力較差。相較之下，GC-MS/MS方法具有較高的抗干擾能力以應對復雜的藥物基質，且檢測靈敏度高、準確性好，是檢測藥品中磺酸酯類化合物的有效手段。因此，本應用中心針對三種對甲苯磺酸酯基因毒性雜質，基于自主研制的GC-MS/MS平臺建立了對甲苯磺酸酯的快速且高靈敏度的檢測方法。

關鍵詞：GC-MS/MS、醫藥、口服藥劑、對甲苯磺酸酯、基因毒性雜質

實驗部分

儀器

表1氣相色譜—三重四極桿串聯質譜儀

表2 氣相色譜—三重四極桿串聯質譜儀參數

試劑及標準品

標準品：對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯均購自Stanford Analytical Chemicals，于4℃冰箱保存。

試劑：丙酮和乙酸乙酯均為色譜級。

樣品前處理

（1）水溶性藥品

稱取藥品粉末，加水振搖均勻，超聲10 min，再加入乙酸乙酯，振搖混勻后充分超聲提取，取上層有機相經無水硫酸鈉除水后，過濾膜，上機測試。

（2）脂溶性藥品

稱取藥品粉末，加入乙酸乙酯，振搖均勻，超聲10 min，過濾膜，上機測試。

線性和檢出限

在對應的線性范圍內，3種對甲苯磺酸酯類化合物的線性系數r均在0.995以上，線性良好。以5 μg/L 標準溶液進樣，按照S/N=10和S/N=3計算定量限和檢出限，檢出限為0.4~0.8 μg/L，定量限為1.3~2.7 μg/L，具體結果見表3。對甲苯磺酸酯類化合物總離子流圖如圖1所示。 

圖1  20.0 μg/L對甲苯磺酸酯類化合物總離子流圖

表3 對甲苯磺酸酯各組分信噪比（5 μg/L濃度水平下）以及檢出限和定量限

加標回收率

對空白藥品進行加標回收率測試，加標濃度為1 μg/g，連續進樣三針，各目標化合物計算濃度（單位為μg/L）與回收率結果如下所示，3種對甲苯磺酸酯平均回收率在80%~110%之間。

樣品測試

按照2.3中樣品前處理方法處理實際藥品，實際藥品中三種對甲苯磺酸酯均未檢出，色譜圖見圖2。

圖2  實際藥品色譜圖

結語

本文建立了一種使用三重四極桿氣質聯用儀測定藥品中3種對甲苯磺酸酯類化合物的分析方法。本文考察了該方法的線性、精密度、靈敏度和準確度等，結果顯示標準曲線線性良好，相關系數大于0.995，方法精密度低于10%，檢出限低于1 μg/L，定量限低于3 μg/L，回收率在80%~110%之間。因此，本方法可以對藥品中3種對甲苯磺酸酯類化合物進行快速、準確、靈敏的定量分析。

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l 附錄

設備與耗材方案

一、EXPEC 5231 系統標準配置詳情

二、標準品

• 氣相色譜-三重四極桿質譜聯用儀GC-MSMS

  檢測儀器在線詢價